химический каталог




Молекулярная биофизика

Автор М.В.Волькенштейн

я, что равновесие между веществом на твердом сорбенте и в растворе устанавливается мгновенно, и можно пренебречь продольной диффузией,

§ 2.4. АМЙНОкИСЛОТНЫЙ COCf Afi БЕЛКОВ

71

Уравнение материального баланса при перемещении одно-компонентного вещества сверху вниз в колонке имеет вид

. дт

дс

(2,30)

а

дс

дх DV 1 к 6V

где т — количество вещества, сорбированного 1 г сорбента, число граммов сорбента на 1 см длины колонки, с— концентра* ция вещества, V — объем протекшего раствора (мл), а — доля объема пор в колонке, х — расстояние от верха колонки. Последнее уравнение можно переписать в виде

дс дс . дт /« on™-дТ = а^Г + <>-дГ' (2'31)

где w — скорость протекания раствора. Задача состоит в решении такого рода уравнений, т.е. в нахождении зависимости т и с от w, t и х. Эти зависимости дают законы деформирования границ хроматографических зон.

Если раствор представляет собой смесь двух веществ, то они сорбируются в разных местах колонки. При протекании раствора сначала из колонки выходит первая, более подвижная, а затем обе компоненты в виде исходного раствора. Выходная кривая (зависимость концентрации на выходе от объема V протекшего раствора) имеет вид, показанный на рис. 2.2. Она позволяет производить фронтальный анализ. Концентрация первой компоненты иа первой ступени обозначена Си, концентрации второй компоненты на первой и второй ступенях С\2 и с22- Объемы V] и V2 называют объемами задержки. При лэнгмюровских изотермах адсорбции

&\С\2 ^2^22 /с\ ог\\

где Ш] и т2 — количества первой и второй компонент в адсорбированном состоянии на 1 г сорбента, 6* и U — константы. Вместе с тем ^

(2,33)

(2,34)

Из (2.32) и (2.33) следует, что

си-en i-kl/k2 •

Значения Vi и V2 определяют из хроматографических опытов с отдельными компонентами. Таким образом можно найти Си, если известна величина Сц.

В действительности установление равновесия происходит отнюдь не мгновенно. Поэтому зоны несколько размываются. Теория объясняет это размытие. Распределение концентрации в зоне оказывается гауссовым.

Теория и методы хроматографии описаны в обширной монографической и журнальной литературе (см., например, [I, б—Ю]). Здесь мы ограничиваемся лишь краткими сведениями о, хроматографическом анализе белковых гидролизатов (ср.

[1,2,10]).

МЛ

Весьма наглядно двумерное разделение аминокислот на бумаге—метод «отпечатков пальцев». В этом случае сорбентом

Рис. 2.3. Часть концентрационной кривой гидролизата рибонуклеазы.

По оси ординат—интенсивность окраски с нннгндрином. По оси абсцисс—объем элюата.

служит плотная фильтровальная бумага. На краю прямоугольного листа помещают каплю анализируемого гидролизата. Затем лист подвешивают к лотку со специальным растворителем и промывают им. Через определенное время бумагу высушивают, лист поворачивают на 90° и вновь промывают уже другим растворителем. Лист снова высушивают, обрызгивают растворами веществ, дающих цветные реакции с аминокислотами, и нагревают. На листе появляются цветные пятна, отвечающие разным аминокислотам. По их положению можно определить аминокислотный состав, б ел к а. Вырезая участки бумаги с пятнами и элю-ируя из них аминокислоты растворителями, можно определить весовое содержание аминокислот.

Совершенным методом исследования аминокислотного состава белков является хроматография на ионнообменных смолах, в частности яа катионообменнике Дауэкс-50, содержащем сульфогруппы, связывающие ЫНз-группы аминокислот. Элюция производится при разных рН, концентрациях буфера и темперагурах. Аминокислоты вымываются в определенной последовательности. Небольшие порции элюата одинакового объема собирают автоматически в пробирки при помощи коллектора. Каждую фракцию смешивают с дающим окраску реагентом (нингид-рин), нагревают в стандартных условиях и определяют на фотометре интенсивность окраски. Проводят калибровку для каждой аминокислоты, учитывающую зависимость поглощения света от концентрации. Площадь каждого «пика» отвечает количеству данной аминокислоты в гидролизате (рис. 2.3) [11]. Вея процедура сейчас автоматизирована и установление аминокислотного состава белка не составляет проблемы.

§ 2.5. ПЕРВИЧНАЯ СТРУКТУРА БЕЛКОВ

Последовательность аминокислотных остатков в полипептид-.ной цепи называется ее первичной структурой. Определение пер_-вичной структуры производится путем частичного гидролиза белка с помощью специфических протеаз, катализирующих расщепление пептидной связи лишь между определенными остатками. Так, трипсин атакует лишь те пептидные связи, которые образованы СО-группами остатков основных аминокислот — Apr или Лиз. В результате образуется смесь коротких полипептидных цепей, олигомеров. Такие короткие цепи называются пептидами. Их исследование производится посредством химических и физико-химических методов (хроматография, масс-спектроскопия). Воздействуя другим ферментом, можно «разрезать» белок по другим связям, получить смесь других пептидов. N- и С-конце-вые остатки белка (см. стр. 68) определяются в результате

страница 26
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228

Скачать книгу "Молекулярная биофизика" (4.80Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
кресло престиж gtp
промышленные стулья и табуреты от производителя

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(29.04.2017)