проведения количественного анализа в хроматографии исследователю нужно ответить на один из двух вопросов:

1) какому веществу соответствует каждый пик на хроматограмме

анализируемой смеси;

2) какому пику на хроматограмме соответствует искомое

анализируемое вещество.

Решением этих проблем и занимается качественный анализ, или идентификация.

Для проведения идентификации в хроматографии исследователь должен иметь чистые вещества, наличие которых предполагается в анализируемой смеси. Такие чистые вещества называются СТАНДАРТАМИ.

Растворы стандартов определенной концентрации с известной погрешностью приготовления называются стандартными растворами.

Далее идентификация проводится следующим образом:

1) подбираются хроматографические условия для разделения

анализируемой смеси;

2) определяются времена удерживания всех хроматографических

пиков анализируемой смеси;

3) при этих же условиях хроматографируется стандарт, и

определяется время удерживания его хроматографического пика.

Если ни у одного хроматографического пика анализируемой смеси нет времени удерживания, близкого ко времени удерживания стандарта, тогда искомое вещество в анализируемой смеси отсутствует.

Если в анализируемой смеси находится хроматографический пик со временем удерживания, близким ко времени удерживания стандарта, то возможны следующие варианты:

1) вещество стандарта и компонент анализируемой смеси - одно и то же соединение; в этом случае идентификация закончена;

2) вещество стандарта и компонент анализируемой смеси - одно и то же соединение, но хроматографический пик компонента анализируемой смеси является не разделенным с хроматографическим пиком другого соединения. В этом случае

необходимо изменить хроматографические условия и разделить плохо разделившиеся пики;

3) вещество стандарта и компонент анализируемой смеси имеют близкие времена удерживания, но являются разными веществами; для выяснения такого случая необходим дополнительный к времени удерживания параметр стандарта и анализируемого вещества.

Использование спектрофотометрического детектора

хроматографов серии "Милихром" значительно облегчает ситуацию. Детектор вместе с компьютером позволяют получить хроматограмму на нескольких длинах волн одновременно и рассчитать дополнительный параметр для идентификации - спектральное отношение. СПЕКТРАЛЬНЫМ ОТНОШЕНИЕМ Q называется отношение высот хроматографического пика на разных длинах волн (рис. 6.1, табл.6.1 и 6.2).

Таким образом, совпадение двух параметров - времени удерживания и спектрального отношения пика № 6 и стандарта феназепама позволяет утверждать, что пик № 6 на хроматограмме -феназепам.

В ВЭЖХ допустимо отклонение времен удерживания при идентификации не более 2%. Точность спектральных отношений зависит от величины оптической плотности вещества и конструкции детектора.

6.2 Количественный анализ

Для количественного анализа в ВЭЖХ в основном используется метод внешнего стандарта. Последовательность проведения анализа следующая:

1) производится градуировка хроматографа по стандартным растворам определяемого соединения, т.е. строится зависимость концентрации определяемого соединения от площади его хроматографического пика;

2) градуировка строится таким образом, чтобы ожидаемый

диапазон концентраций определяемого соединения в исследуемой

смеси находился в середине градуировочной кривой;

3) определив площадь S хроматографического пика

анализируемого соединения из хроматограммы анализируемой смеси,

по градуировочному графику устанавливают концентрацию

определяемого соединения.

7. МЕТОДИКИ НА ИДЕНТИЧНОСТЬ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

К методикам на идентичность исследуемых образцов относят в первую очередь методики, применяемые экспертами-криминалистами или различного рода инспекциями при доказательстве идентичности или фальсификации веществ. Такого рода методики ориентированы на использование метода «отпечатков пальцев» в отношении исследуемых образцов или на комбинацию этого метода с поиском индивидуальных веществ в смесях и их количественным определением. Метод «отпечатков пальцев» в хроматографическом варианте представляет собой сравнение хроматограмм исследуемых веществ по временам удерживания, спектральным отношениям и соотношениям интенсивностей основных компонентов анализируемой смеси.

7.1 Хроматографический анализ наркотических и одурманивающих веществ

Несмотря на большое разнообразие хроматографических систем, применяемых для анализа наркотических и одурманивающих веществ [1, 2], наиболее перспективно применение универсального элюента состава: «ацетонитрил-О.ОЗМ КН2Р04 -диэтиламин (ДЭА)-фосфорная кислота» или «ацетонитрил-вода-диэтнламин-фосфорная кислота» с рН = 3, применяемого для анализа ионогенных соединений в обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ [3]. Такой элюент с различным содержанием ацетонитрила пригоден для анализа любых наркотических или одурманивающих веществ в их любом сочетании, а в градиентном режиме по ацетонитрилу может быть использован для проведения ск