16 и 18 углеродными атомами (рис. 4.6).

Названия адсорбентов С8, С16, С18 соответствуют привитым на силикагеле углеводородным цепочкам длиной 8, 16, 18 углеродных атомов. Часто встречающееся в литературе название "ОДС" соответствует адсорбенту С18 (октадецилсилокеан - реагент для прививки). Наиболее неполярными свойствами обладают С16 и С18 (существенной разницы в их свойствах нет).

Наличие близких по свойствам адсорбентов С16 и С18 объясняется только доступностью реактивов для прививки -соответствующих силоксанов с длиной углеводородной цепочки 16 или 18 углеродных атомов. В России доступнее С16, за рубежом -С18.

В России распространены следующие ОФ-адсорбенты: Силасорб С18 (ЛАХЕМА, Чехия); Силасорб SPH С18 (ЛАХЕМА,Чехия); Сепарон SGX С18 (ТЕССЕК, Чехия); Нуклеосил С18 (Машери-Нагель, Германия); Диасорб 130 С16 Т (БиоХимМак СТ, Россия). Наилучшими качествами обладают Нуклеосил С18, Сепарон SGX

С18 и Диасорб 130С16Т.

4.2.1 Элюотропный ряд

Элюенты для ОФ ВЭЖХ располагаются в элюотропный ряд в соответствии с увеличением элюирующей силы (табл. 4.2).

В обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ применяются в основном водно-метанольные, водно-ацетонитрильные или водно-ацетонитрило-метанольные смеси. 2-пропанол, тетрагидрофуран и хлороформ используются значительно реже. Применение других растворителей вообще является экзотикой.

Любой огранический растворитель, используемый в смеси с водой в элюенте для ОФ ВЭЖХ, называется МОДИФИКАТОРОМ.

Значение воды в ОФ ВЭЖХ не ограничивается ролью самого слабого элюента, особенно при анализе ионогенных соединений. Например, бензойная кислота элюируется водой, но не элюируется значительно более сильным элюентом - ацетонитрилом. В данном случае вода выполняет две функции, которые не может выполнить такой апротонный растворитель, как ацетонитрил: 1) адсорбционная модификация остаточных силанольных групп на поверхности алкил-привитых силикагелей; 2) ионизация и сольватация бензойной кислоты, приводящая к уменьшению удерживаемого объема бензойной кислоты.

4.2.2 Основные правила регулирования селективности в ОФ ВЭЖХ

Правило 1. "О ПЛАВНОМ РЕГУЛИРОВАНИИ ЭЛЮИРУЮЩЕЙ СИЛЫ"

Элюирующая сила элюента в ОФ ВЭЖХ регулируется содержанием модификаторов: ацетонитрила, метанола или 2-пропанола в элюенте типа "вода-модификатор". Чем больше модификатора в элюенте, тем больше элюирующая сила элюента, тем меньше удерживаемый объем вещества (рис. 4.7).

ю.оо

8 .ООО

6 .ООО

4. ООО

2.ООО•

О. ООО

а

Правило 2. "ОБ ИСПОЛЬЗОВАНИИ СМЕШАННОГО МОДИФИКАТОРА"

Для увеличения селективности и улучшения разрешения соединений, имеющих несколько ОН-групп, полезно использовать смешанный модификатор в соотношении 1:1. Обычно в качестве смешанного модификатора применяется смесь метанола и ацетонитрила в соотношении 1:1 по объему (рис. 4.8), хотя могут использоваться смеси «метанол-этанол» или «этанол-изопропанол».

Длина волны 220 нм; колонка 80x2 заполнена Сепароном SGX С18; расход

элюента 100 мкл/мин.

Правило 3. "О ФОРМЕ И ШИРИНЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ ПИКОВ"

Параметры

В отличие от хроматографии на силикагеле, где уширение хроматографических пиков за счет межмолекулярных взаимодействий проявляется достаточно редко, для обращенно-фазового варианта ВЭЖХ уширение хроматографических пиков средне- и сильнополярных соединений - правило. Основной причиной уширения хроматографических пиков является существование на поверхности адсорбента сложных равновесных систем типа "молекулярный ион - молекула - молекулярный ассоциат -молекулярный полиассоциат" [12]. Каждая из этих форм ионогенного соединения имеет свое время удерживания - в результате хроматографический пик соединения уширяется, и создается впечатление полной потери эффективности хроматографической колонки (рис. 4.9).

Образец :benaoin4J!im 10й0яп- JmklD

1 1 1

030 220»

230

Ш

020

0.10

-Тлин

с но 1 1 0 1 2 —1

3 1

4 1

5

ХроматограммаПараметры иамароння"

Образец . benzoirkO|« кта 1 0/50мл - Smkl

Колонка 64*2 cbasorb С1 В

Элюент ALLOT ом ктрял-ecyael 0/9О hi -5 7

/Детектор спектрофотометр ил область

Дата . 09 02.80 6:12 16

? пераггор Сычев

^Пераму^ЪГ' Хро+иагограт^ма |

Рис. 4.9. Хроматограмма бензойной кислоты

Симметричная форма хроматографических пиков и высокая эффективность разделения средне- и сильнополярных соединений достигается несколькими способами, в зависимости от класса анализируемых соединений:

1) смещение равновесия "диссоциированная форма молекулярная форма" адсорбата в какую-либо одну сторону;

достигается подкислением или слабым подщелачиванием

(подщелачиванием можно пользоваться только при применении

полимерных адсорбентов на основе полистирола!) элюента;

одновременно при подкислении адсорбционно модифицируются

остаточные силанольные группы на поверхности адсорбентов С8,

С16,С18;

2) увеличение времени удерживания адсорбата достигается путем добавления неорганических солей в элюент. Смысл пр