химический каталог




Биохимия. Том 1

Автор Л.Страйер

ы и ионы проходят через поры диализной мембраны и выходят из мешочка в диализат.

пень очистки данного белка на каждом этапе выделения.

Отделение белков от низкомолекулярных веществ проводят путем диализа через полупроницаемую мембрану (рис. 2.21). Белки, молекулярная масса которых превышает

Дальтон (Да)единица массы, практически равная массе атома водорода (т.е. 1,0000 по шкале атомных масс). Терминами «дальтон» и «молекулярная масса» пользуются как взаимозаменяемыми; например, белок в 20 000 дальтон имеет молекулярную массу 20000. Наименование дано в честь Джона Дальтона (1766-1844), разработавшего атомарную теорию строения материи. Килодальтон (кДа)единица массы, равная 1000 дальтон. Масса большинства белков лежит в пределах от 10 до 100 к дал.

Разделение белков по размеру молекулы проводят также методом гель-фильтрации (рис. 2.22). В этом случае пробу наносят на колонку из нерастворимого, но высокогид-ратированного углеводного полимера, состоящего из мелких частиц в виде зерен диаметром обычно ОД мм. Обычно используют имеющийся в продаже сефадекс. Небольшие молекулы проникают внутрь частиц полимера, а крупные-нет. В результате низкомолекулярные вещества оказываются в водном растворе как внутри частиц, так и между ними, тогда как высокомолекулярные-в водном растворе только между частицами. Вследствие этого высокомолекулярные вещества, оказавшись в относительно меньшем объеме, быстрее проходят сквозь колонку и первыми снимаются с нее.

Разделение белков на основе различий в общем заряде осуществляется методом ионообменной хроматографии. Если белок имеет положительный заряд при рН 7, то он обычно связывается на колонке ионообмен-ника, содержащего карбоксильные группы, тогда как отрицательно заряженный белок таким ионообменником не связывается. Такой положительно заряженный белок снимают с колонки путем добавления в элюи-рующий буфер хлористого натрия или какой-либо другой соли. При этом ионы натрия конкурируют с положительно заряженными группами белков за места связывания на колонке. Те белки, у которых плотность положительного заряда ниже, вымываются с колонки первыми, за ними следуют белки с более высокой плотностью положительного заряда. Помимо общего заряда на поведение белков при ионообменной хроматографии оказывают влияние и другие факторы. Общий заряд белка определяет также и скорость его миграции в электрическом поле. На этом принципе основан метод электрофореза, который мы подробнее обсудим в одной из следующих глав (разд. 5.3). Здесь же стоит отметить высокую разрешающую способность метода электрофореза. Так, используя двумерный электрофорез, удалось получить более 1000 различных фракций при однократном разделении белков такого простого организма, как бактерия E.coli (рис. 2.23).

Еще один мощный и универсальный способ очистки белков-хроматография по сродству (аффинная хроматография). В основе метода лежит характерное для многих белков высокое сродство к специфическим химическим группам. В частности, растительный белок конканавалин А можно выделить из неочищенного экстракта, пропуская экстракт через колонку, содержащую ковалентно присоединенную глюкозу. Конканавалин А, обладающий сродством к глюкозе, связывается с колонкой, тогда как остальные белки, как правило, на колонке не адсорбируются. Далее связанный конканавалин А снимают с колонки концентрированным раствором глюкозы. При этом в участках связывания глюкозы в молекулах конканавалина А происходит замещение присоединенных к колонке остатков глюкозы на глюкозу, находящуюся в растворе (рис. 2.24). Итак, с помощью хроматографии по сродству можно выделять белки, которые распознают какую-то группу X; для этого: 1) X или ее производное ковалентно присоединяют к колонке; 2) наносят на колонку белковую смесь и затем не связавшиеся белки удаляют буфером; 3) элюируют искомый белок, добавляя X в виде раствора высокой концентрации.

Высвободившийся белок

Рис. 2.24. Хроматография по сродству (аффинная хроматография) конканавалина А (показан желтым) на колонке, содержащей ковалентно присоединенные остатки глюкозы (Г).

2.6. Последовательность аминокислот в белках уникальна и детерминируется генами

В 1953 г. Фредерик Сэнгер (Sanger) определил последовательность аминокислот в белковом гормоне-инсулине (рис. 2.25). Эта работа представляет собой веху в развитии биохимии, ибо в ней впервые было показано, что белок имеет строго определенную последовательность аминокислот. Кроме того, это достижение послужило стимулом для других исследователей подвергнуть аналогичному анализу большое множество белков. И действительно, к настоящему времени установлена полная последовательность аминокислот у нескольких сотен белков. Самое поразительное, что каждый белок имеет уникальную, точно определенную последовательность аминокислот. В серии остроумных работ, проведенных в конце

Цепь А

S —

21

Gly-He-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Ala-Ser-Val-Cys-Ser-Leu-Tyr-Gln-Leu-Glu-Asn-Tyr-Cys-Asn

5 ! ю )ъ

S

Цепь В

S

I

10

25

30

Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-

страница 10
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113

Скачать книгу "Биохимия. Том 1" (6.46Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
сайты помощи больным
узи на определение беременности
где дешево купить итальянские ручки для кухни
танцевальное мероприятие сочи июль 2017

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.06.2017)