химический каталог




Биохимия. Том 3

Автор Л.Страйер

еной матрицы в различных группах генов происходит и в клетках Е. coli.

25.10. РНК-полимераза Е. coli состоит из субъединиц

РНК-полимераза Е. coli - очень большой и сложный фермент. Масса целого фермента равна примерно 500 кДа. РНК-полиме-раза состоит из отдельных субъединиц (табл. 25.3); это можно доказать, вызвав диссоциацию фермента в концентрированном растворе мочевины. Субъединичный состав целого фермента, называемого го-лоферментом,- а2РР'о. Как это видно из

< >

1 мкм

Рис. 25.12. Электронная микрофотография РНК-полимеразы-голо-фермента, связанного со многими промоторными участками фрагмента ДНК фага Т7. [Williams R.C., Ргос. Nat. Acad. Sci., 74, 2313 (1977).]

последующего текста, после того как инициация синтеза РНК произошла, а-субъе-диница отделяется от фермента. РНК-по-лимераза без а-субъединицы называется минимальным ферментом или кор-фермен-том (ое2РР'). Каталитический участок РНК-полимеразы находится в кор-ферменте. Установлено, что в'-субъединица участвует в связывании с ДНК-матрицей, а в-субъе-диница - в связывании субстратов - рибону-клеозидтрифосфатов. а-Субъединица голо-фермента участвует в выборе участка инициации транскрипции.

Синтез РНК РНК-полимеразой Е. coli происходит в три этапа, называемых 1) инициация, 2) элонгация и 3) термина-ция. С этими процессами мы познакомимся несколько ниже.

25.11. Транскрипция инициируется на промо-торных участках матричной ДНК

Транскрипция начинается в определенных участках матричной ДНК, называемых промоторами. Как РНК-полимераза находит эти участки? Один из подходов к решению этой проблемы состоит в том, чтобы выделить те фрагменты, которые голофермент РНК-полимеразы защищает от расщепления панкреатической дезоксирибонуклеазой, и определить в этих фрагментах последовательность нуклеотидов. Другой подход сводится к тому, чтобы исследовать ряд мутантов с повышенной или пониженной интенсивностью транскрипции определенных генов. В результате таких исследований было установлено, что про-моторные участки состоят примерно из сорока пар оснований, что соответствует фрагменту ДНК длиной примерно 140 А. Как показал анализ различных промоторов Е. coli и фагов, функцию сигнала узнавания в основном выполняет последовательность семи пар оснований, середина которой находится на расстоянии примерно 10 нуклеотидов перед точкой, с которой начинается кодирование мРНК (рис. 25.13). Второй участок узнавания расположен на расстоянии около 35 нуклеотидов перед точкой начала мРНК; он также участвует в первоначальном связывании РНК-поли-меразы.

25.12. а-Субъединица обеспечивает узнавание промоторных участков РНК-полимеразой

Кор-фермент (ое2РР') РНК-полимеразы не может начинать транскрипцию в промо-торных участках. Для специфической инициации необходим голофермент офр'а Роль сигма-субъединицы была открыта следующим образом. Если РНК-полимера-зу очищали хроматографией на колонке с фосфоцеллюлозой, то она была практиЗдесь начинается мРНК 1

6' 3'

A CGTATGTTGTGTGGA

Б GCTATGGTTATTTCA

6 GTTAACTAGTACGCA

Г GTGATACTGAGCАС А

Д GTTTTCATGCCTCCA

? TTATAATGGTTACAА

Рис. 25.13. Промоторные последовательности лактозного (А), галактоз-ного (Б) и триптофанового (В) оперонов E.coli, фагов X (Г) и фХ174 (Д) и вируса SV-40 (Е). Предполагаемая область гомологии, так называемая последовательность Прибнова (Pribnow), показана зеленым.

чески лишена активности при использовании в качестве матрицы ДНК фага Т4, но сохраняла активность в опытах с ДНК из тимуса теленка. Наряду с этим та же РНК-полимераза, очищенная центрифугированием в градиенте концентрации глицерола, была, напротив, весьма активна на обеих матрицах. Из этого наблюдения можно было сделать вывод, что в препарате РНК-полимеразы, очищенной на фосфоцеллю-лозе, не хватает какого-то фактора. Так оно и было (рис. 25.14). Активность фермента, очищенного на фосфоцеллюлозе, значительно увеличивается при добавлении другой фракции, элюирующейся с колонки. Этот стимулирующий фактор сам по себе не обладает каталитической активностью. Он был назван сигма (о)-фактором. Последующие эксперименты показали, что фермент, очищенный на фосфоцеллюлозе, лишен о-субъединицы, тогда как фермент, очищенный в глицероле, содержит ее. Таким образом, препарат, проявлявший максимальную активность при использовании в качестве матрицы ДНК фага Т4, представлял собой голофермент а2рр'о а кор-фер-мент а2рр' был не в состоянии транскрибировать эту ДНК. Добавление о-субъеди-ницы к кор-ферменту приводило к реконструкции вполне активного голофермента. Кор-фермент обладал способностью транскрибировать ДНК тимуса теленка, так как эта матрица содержит много одноце-почечных разрывов. РНК, синтезированная кор-полимеразой in vitro, не соответствует транскриптам, образующимся in vivo. В частности, кор-фермент транскрибирует обе цепи фаговых ДНК-матриц, тогда как голофермент транскрибирует асимметрично одну цепь, как он это делает in vivo.

Сигма-субъединица обеспечивает специфическую инициацию, снижая в 10 раз сродство РНК-полимеразы к ДНК,,

страница 24
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193

Скачать книгу "Биохимия. Том 3" (2.99Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить букет сирени зимой
Компания Ренессанс: лестницы металлокаркас - качественно и быстро!
кресло ch low v
аренда боксов, помещений для хранения вешей

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)