химический каталог




Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка

Автор А.С.Спирин

золированная 50S субчастица может удерживать на себе пептидил-М*НК, а также лабильно взаимодействовать с 3'-концевыми фрагментами N-блокированных аминоацил-тРНК как донорными субстратами. Если к таким 50S частицам с пептидил-тРНК или ее аналогом добавить пуромицин, то между ними идет пептидилтрансферазная реакция. Следовательно, пептидилтрансферазный центр целиком локализован на 50S субчастице (или на 60S субчастице у эукариот).

Малая (30S или 40S) субчастица никакого вклада в катализ реакции не вносит.

Субстратами собственно пептидилтрансферазного центра рибосомы являются, как было показано, не целиком пептидил-тРНК и амино-ацил-тРНК, а лишь 3'-концевые части тРНК с примыкающими аминоацильными остатками. В отношении акцепторного субстрата это ясно уже из рассмотрения структуры пуромицина. Кроме пуроми-цина, хорошим акцепторным субстратом может быть ряд аминоацил-аденозинов (A-Phe, A-Tyr, A-Lys, A-Met, А-А1а, и др.), хотя рА-Аа и особенно СрА-Аа обычно еще более активны. Донорными субстратами могут быть рА-(Ас-Аа) или pA-(F-Aa), а еще лучше СрСрА-(Ас-Аа) или CpCpA-(F-Aa). Поэтому, если к изолированным вакантным 50S субчастицам добавить такие аминоацилолигонуклеотиды, как CpCpA-(F-Met) и пуромицин или A-Phe, то 50S субчастица будет работать как обычный фермент, катализируя реакцию транспептидации между низкомолекулярными субстратами:

CpCpA4F-Met) + A-Phe ? СрСрАон + A4F-Met-Phe)

Оба продукта на 50S субчастице не удерживаются и сразу появляются в растворе.

Естественно, что неоднократно предпринимались настойчивые

попытки выделить «фермент» из 50S субчастицы, т. е. найти рибосомный белок, ответственный за катализ транспептидации. Однако ни

в одном случае изолированные белки такой активностька не обладали.

Было решено, что ферментная белковая структура, состоязздая, возможно, из нескольких белков, интегрирована в 50S субчастиц\так, что

при выделении белков она разрушается. \

Различные аналоги пептидил-тРНК и аминоацил-тРНК, несущие химически активную или фотоактивируемую группу на аминоацильном остатке при З'-конце тРНК (см. рис. 81 и 82,1), такие\ как различные №-бромацетиламиноацил-тРНК, NE -бромацетиллизил-тРНК, Н-(идра-нитрофеноксикарбонил)чренилаланил-тРНК, И-(2-нитро-4-азидофенил)-глицилфенилаланил-тРНК и другие, были использованы как аффинные метки для идентификации белков в районе пептидилтрансферазного центра. В большинстве опытов наиболее интенсивные сшивки образовывались с белками L2 и L27; белки L6, Lll, L16, L18 и L33 также часто отмечались как сшиваемые соседи субстратов пептидилтрансферазного центра.

В опытах по частичной разборке и реконструкции 50S субчастиц критичными для пептидилтрансферазной активности были белки L6, L11 и L16; их добавление к производным 50S субчастицы, лишенным более трети исходных белков, восстанавливала активность. Однако позже выяснилось, что добавление только одного белка L16, но в большом избытке, тоже восстанавливает пептидилтрансферазную активность; оказалось, что белки L6 и L11 лишь помогают белку L16 прочно встроиться в частицу. Далее были получены данные, еще более подтверждавшие ключевую роль белка L16 в организации пептидилтрансферазного центра: химическая модификация его гистиди-нового остатка инактивировала пептидилтрансферазу. Тем не менее,

конце концов оказалось, что и встроенный белок L16 не является &птидилтрансферазой или ее активным участком: в модифицирован-ионных условиях при наличии других белков 50 S субчастицы 53 белка L16 проявляют хорошую пептидилтрансферазную активность. В то же время, опыты с аффинным мечением пептидилтрансфе-шого центра активными аналогами аминоацил-тРНК или пептидил-ЩК неоднократно указывали, что хотя белки действительно часто 5наруживаются как сшиваемые соседи, но рибосомная 23S РНК Шляется наиболее предпочтительной мишенью. Сшивки преимущест-шо с 23 S РНК были получены во многих опытах, включая пионерную работу Д. Г. Кнорре и А. С. Гиршовича с сотрудниками, впервые даменившими принцип аффинного мечения для изучения функцио->ных центров рибосомы. Идентификация места сшивки акцепторно-конца тРНК, несущего фотоактивируемую метку, с 23 S РНК, |также нуклеотидные заменькя 23S РНК при мутациях, затрагиваю-пептидилтрансферазн^ш^центр, указьюают на его положение в юне эволюционно "консервативной последовательности 2450—2600 |редпоследнего домена (домен V) (см. рис. 45). Нельзя исключать, пептидилтрансферазный центр организован преимущественно РНК, а не белками. Однако на сегодняшний день более осторожной точкой зрения является предположение о совместном участии |3S РНК (домена V) и некоторых белков 50S субчастицы в организации пептидилтрансферазного центра.

Локализация пептидилтрансферазного центра на морфологически шмой поверхности 50S субчастицы может быть сделана на осно-1ии знания того, с какими белками комплексирована последователь-УТЬ 2450—2600 домена V 23S РНК, при условии, если положения ix белков известны из иммуноэлектронной микроскопии. Известно, с этой последовательностью связан белок

страница 61
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136

Скачать книгу "Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка" (3.76Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
T2600G-52TS
узи печени натощак
щит управления vkt
слова благодарности спонсорам в оказании помощи

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(16.12.2017)