химический каталог




Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка

Автор А.С.Спирин

рисоединяются, по-видимому, к одному и тому же району рибосомной частицы. Скорее всего, их участки связывания либо идентичны, либо перекрывающиеся. Во всяком случае, все перечисленные белки конкурируют друг с другом за место посадки на рибосому и никак не могут присутствовать на ней одновременно.

Так как все перечисленные белки после присоединения к рибосоме быстро освобождаются в результате гидролиза ГТФ, то изучение их связывания в опытах in vitro удобнее всего проводить, заменив ГТФ его нерасщепляемым аналогом, таким как гуанилил-метилендифосфонат (GMP-PCP) или гуанилилимидодифосфат (GMPjjPNP) (рис. 87). Комплекс белка с таким аналогом взаимодействует | рибосомой и задерживается на ней.

Связывание белка EF-G с 70S рибосомой изучено, пожалуй, лучше jjicero. EF-G с GMP-PCP может образовывать комплекс как с транслирующей, так и с вакантной рибосомой. EF-G с ГТФ также взаимодействует как с транслирующей, так и с вакантной рибосомй, но не Задерживается на них, так как ГТФ расщепляется, и EF-G с ГДФ Освобождается. Однако в присутствии антибиотика фусидовой кислоты (см. рис. 109) EF-G сохраняет сродство к рибосоме также и после расщепления ГТФ и, соответственно, задерживается на рибосоме. Точно так же, как и полная рибосома, ведет себя изолированная 50S субчастица: EF-G с GMP-PCP или EF-G с ГТФ (точнее, С продуктом его расщепления ГДФ) в присутствии фусидовой кисло-ты образует с ней довольно стабильный комплекс; EF-G с ГТФ взаимодействует с 50S субчастицей, давая в результате расщепление ГТФ и освобождение EF-G с ГДФ. Взаимодействие EF-G с изоли-Зрованной 30S субчастицей не обнаруживается. Следовательно, участок Связывания EF-G формируется в основном 50S субчастицей рибосомы. » Для идентификации белковых компонентов 50S субчастицы, формирующих факторсвязывающий участок, были использованы, в частности, антитела против различных рибосомных белков. Оказалось, что только антитела против белка L7 / L12 ингибировали связывание EF-G, в то время как антитела против большого разнообразия других белков не влияли на эту функцию. Первоначально из этих опытов был сделан вывод, что местом присоединения EF-G является белок L7 / L12. Действительно, избирательное удаление белка L7 / L12 Ш 50S субчастицы (с помощью диссоциации 0,5 М NH4C1 с этанолом) приводило к значительному падению связывания EF-G с рибосомой. Однако сродство не исчезало совсем, а лишь уменьшалось. Выло показано, что даже при полном отсутствии белков L7 / L12 на рибосоме EF-G способен, хотя и гораздо менее эффективно, не только связываться, но и осуществлять свои функции в гидролизе ГТФ и в транслокации. Следовательно, белок L7 / L12 лишь помогает связыванию EF-G, а основным связывающим компонентом, ввиду отсутствия других причастных белков, должна быть рибосомная РНК. В прямых экспериментах это было подтверждено: было найдено специфическое сродство определенного района 23S РНК к EF-G.

Известно, что антибиотик тиострептон, препятствующий связыванию EF-G (так же как и EF-TU) с 50S субчастицей, присоединяется в районе локализации белка L11 и защищаемой им последовательности 23S РНК 1052—1112, представляющей собой составную шпильку, с большой боковой петлей, в домене II (см. рис. 45). Кажется вероятным, что этот район 23S РНК находится вблизи места связывания EF-G с 50S субчастицей.

Следует отметить, что хотя узнавание и связывание EF-G в основ-Ном, по-видимому, обеспечивается 50S субчастицей рибосомы, фактор контактирует также и с 30S субчастицей. В частности, белок S12 легко может быть сшит дисульфидной связью с EF-G при окислео

О

1 О

1 О

1

р- N 1р- О-Р 1 11 11

О Н О О

О

ОН он

GTP ($S)

Рис. 87. ГТФ и его нерасщелляемые и медленно расщепляемые аналоги, используемые для изучения функций факторов трансляции и рибосомы: GTP — гуанозин-5'-трифосфат; GMP-PCP — нерасщепляемый аналог 5'-гуанилилметилендифосфонат; GMP-PNP — очень медленно расщепляемый аналог 5'-гуанилилимидодифосфат; GTPftS) - медленно расщепляемый аналог гуанозин-5'-(т-тио) трифосфат

Рис. 88. Электронные микрофотографии рибосомных 50S субчастиц с присоединенным EF-G, прореагировавших с антителами против EF-G (а), и фотография модели 50S субчастицы с обозначением (черный кружок) приблизительного местоположения EF-G на субчастице (б) (предоставлены В. Д. Васильевым, Институт белка АН СССР, Пущино)

нии комплекса EF-G с 70S рибосомой. Это говорит о локализации EF-G где-то у границы раздела между рибосомными субчастицами. L Прямая локализация места присоединения EF-G на 50S субчасти-це была сделана с помощью метода иммунной электронной микроскопии. Для этого было получено фотоактивируемое (арилазидное) Производное EF-G (см. рис. 82,4) и сначала специфически при-§юединено к частице в присутствии ГТФ и фусидовой кислоты; |атем путем облучения была образована ковалентная сшивка между |EF-G и местом его прикрепления. 50S субчастицы с таким ковалент-*ю закрепленным белком EF-G были обработаны антителами против 1BF-G и комплексы изучены с помощью электронной микроскопии. На рис. 8

страница 59
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136

Скачать книгу "Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка" (3.76Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Nadoba 728710
купить сигвей airwheel s3
тепловая завеса промышленная
korting ksi 17875 cnf отзывы форум

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(27.05.2017)