химический каталог




Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка

Автор А.С.Спирин

К. /

Связываясь с матричным полинуклеотидом и удерживая его в ходе трансляции, рибосома защищает от действия внешних нуклеаз довольно протяженный участок цепи. Еще в ранних опытах с поли(и) было показано, что рибосома покрьюает участок длиной около 25 нуклеотидных остатков, делая его недоступным для панкреатической рибонуклеазы. На природной мРНК (РНК фага R17 или О) рибосомы Е. coli защищали от нуклеаз участки длиной от 30 до 60 остатков. В последних опытах было показано, что функциональная 70S рибосома, несущая тРНК, защищает от нуклеаз участок матричного полинуклеотида длиной около 45— 50 нуклеотидных остатков, причем в пределах защищаемого участка имеется относительно доступная точка, разрыв при которой дает фрагменты длиной 27—30 остатков и около 15—20 остатков. (Из некоторых наблюдений следует, что эта чувствительная точка матрицы находится непосредственно перед кодоном, связанным с тРНК в А-участке рибосомы; защищаемый 15-нуклеотидный фрагмент представляет собой 3'-проксимальную часть, а 30-нуклеотидный фрагмент—5'-проксимальную часть связанного рибосомой участка матрицы.) Это позволяет думать о большой протяженности мРНК-связывающего участка рибосомы; похоже, что он должен иметь протяженность по крайней мере порядка 10 нм, т. е. масштаба полрибосомы.

Первым вопросом, который встает при попытках локализации любо-Щ функционального участка рибосомы, является вопрос о том, локали-рван ли он на какой-либо одной из двух субчастиц, и если да, io на какой именно, или он организован связывающими центрами Шейх субчастиц вместе. Экспериментально, в самом простом случае, щут вопрос решается таким образом: рибосому диссоциируют на большую и малую субчастицы, их резделяют и к каждой из них в отдельности добавляют испытуемый лиганд (в присутствии достаточной кон-Ьнтрации Mg2+, требуемой для любого связывания на рибосоме), рказалось, что изолированная 30S субчастица связывает матричный Ёолинуклеотид, a 50S субчастица нет. На основании этого в настоящее время принимается, что мРНК-связывающий участок рибосомы локализован только на меньшей (30S или 40S) субчастице. | Для идентификации рибосомных белков, принимающих участие в организации мРНК-связывающего участка 30S субчастицы, использовавшись различные подходы. В опытах по частичной разборке частиц выяснилось, что мРНК-связывающая способность утрачивается при Отделении группы белков SI, S2, S3, S5, S9, S10 и S14; однако реконструкция без любого одного из этих белков давала активные в связывании ^йоли(и) 30S частицы. Вероятно, что большая протяженность мРНК-свя-Эывающего участка предполагает многоцентровое связывание мРНК на частице, т. е, участие нескольких точек связывания; тогда исключение Злобой одной из них может быть не4 критично для функции. С другой Стороны, утрата поли(и)-связывающей способности при отделении всей вышеуказанной группы белков может быть обусловлена нарушением Общей структуры соответствующего района рибосомы, а не обязательно удалением главных компонентов активного участка.

Другой подход для выявления белков функциональных участков рибосомы состоит в их так называемом аффинном мечении. Это значит, что соответствующий лиганд, специфически связывающийся с рибосомой— мРНК, тРНК, белковый фактор трансляции, нуклеотид или антибиотик, — содержит химически активную (рис. 81) или фотоактиви-руемую (рис. 82) группировку, которая атакует рибосомные компоненты, находящиеся в ближайшем окружении, и сшивается с ними; белки, Оказавшиеся сшитыми с лигандом, идентифицируются. Для изучения мРНК-связывающего участка рибосомы использовались олигонуклеотид-ные аналоги мРНК, содержащие или бромацетильные, или 4-[(N-2-xnop-этил-1Ч-метил)амино]-бензилиденовые, или фотоактивируемые арилазид-ные группы (рис. 82,2) на 3'- или 5'-конце, а также фотоактивируемое тиопроизводное поли(11) — поли(84Ц). Кроме того, оказалось возможным фотоактивировать немодифицированные синтетические и природные матричные олиго- и полинуклеотиды [поли(Щ MS2 РНК] для их сшивки с рибосомным окружением. Ясно, что с помощью этого подхода, однако, нельзя отличить компоненты, непосредственно формирующие мРНК-связывающий участок, и таковые, находящиеся вблизи него. Среди белков мРНК-связывающего участка 30S субчастицы и/или вблизи него таким путем надежнее всего обнаруживаются белки S1, S3 и S5 (хотя в отдельных работах отмечается еще не менее десятка других белков 30S субчастицы, включая S4, S9, S18). Исходя из междоменного или междоCI CHgCHgv

ХЛОРАМБУЦИЛ

а

'^N-^ V(CH2)4-C-NH-CH-C-tRNA

CICHgCHa^ \=/ о CH2 6

БРОМ АЦЕТИЛ РНЕ

t A (/ К ,

Br CH2-C-NH-CH-C-tRNAPhe

2 II I II

о снг 0

Рис. 81. Химически активные аналоги аминоацил-тРНК, впервые использовавшиеся как аффинные метки функциональных участков (в данном случае тРНК-связывающих участков) рибосомы (Е. S. Bochkareva et ai. FEBS Lett., 1971, v. 19, p. 121-124; M. Pellegrini et al. Proc. ЦаЛ. Acad. Sci. U.S.A., 1972, v. 69, p. 837-841)

АРИЛАЗИД

V

^/AcPhe-тРНК \\ч Л Олиго(А) unu олиго (U)

/\У*ГТФ

страница 55
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136

Скачать книгу "Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка" (3.76Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
петли армадилло купить
всё для нового года интернет магазин дешево
курсы стилистов в москве
Рекомендуем фирму Ренесанс - металлические лестницы наружные - качественно, оперативно, надежно!

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)