химический каталог




Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка

Автор А.С.Спирин

лков S8 и S15 они узнают и связывают соседние участки цепи и соседние шпильки во вторичной структуре 16S РНК; очевидно, что белки S8 и S15 —соседи также и топографически. К ним примыкают белки S6 и S18, требующие для своего связывания предварительной посадки белков S8 и SJ5 и имеющие, как было показано, места узнавания на первичной структуре РНК в том же районе. Другой пример—это соседствование на цепи 16S РНК (в домене I) мест связывания белков S4, S16, S17 и S20.

Более универсальный подход основан на применении бифункциональных химических реагентов для сшивки белков-соседей друг

§|,; другом. После обработки рибосомных частиц такими реагентами §|дентификация белков в сшитых парах устанавливает, что данные |§?лки являются соседями на рибосоме. Наиболее широко применивши в качестве бифункциональных сшивающих реагентов были ^даимидоэфиры с различной длиной углеродной цепи:

lHN NH(СН2)Л- С С

НЗС - О О - СНЗ

Эфирные группы такого реагента активно атакуются е-аминогруппами ризиновых остатков рибосомных белков с образованием амидинной связи (взамен эфирной). Используя реагенты различной длины, на-пример, диметилсуберимидат (п=-6) и диметиладипимидат («=4), можно Й>убо оценивать, насколько близко белки-соседи расположены друг к другу. Некоторую проблему представляет идентификация белков в ©шитых парах (поскольку белок уже нельзя выделить в индивидуальном виде); одним из путей является иммунологическая идентификация партнеров в паре, без их разъединения. Другой путь —использование расщепляемых сшивок. Например, рибосомные частицы врабатываются сульфгидрильным производным имидоэфира, таким как. метил-4-меркаптобутиримидат:

NH

HS-(CH2)3-C(

О-СНЭ

Он реагирует с аминогруппами белков. Затем производится окисление для образования пар белков через дисульфидные мостики:

} Белок' - NH - С - (СНг)З - S - S - (СШ)з - С - NH - Белок"

К II

NH NH

Отпитые таким путем пары белков выделяются, дисульфидные связи $осстанавливаются, и индивидуальные белки идентифицируются элект-рофоретически. Следующие пары белков, сшиваемых в 30S субчастице даже короткими реагентами, отмечаются особенно часто: S2-S3, S3-S10, S4-S5, S4-S17, S5-S8, S8-S15, S6-S18, S18-S21, S7-S9, S7-S13, S13-S19; все это, по-видимому, непосредственные соседи на рибосоме. Следует отметить также некоторые пары, образуемые при использовании более длинных реагентов: S3-S5, S3-S9, S4-S8.

Общая схема соседствования белков рибосомной 30S субчастицы, как следует из описанных выше подходов, представлена на рис. 63 (кружки, обозначающие сшиваемые белки, соединены линиями, а те, что являются соседями на РНК, помещены в четырехугольники).

Измерение расстояний между белками

Еще более широко проблема взаимного расположения белков решается измерением расстояний между ними. Однако технически это Осуществить гораздо сложнее, чем в предыдущем случае.

Один путь состоит в том, что какие-либо два белка в рибосоме избирательно метятся флюоресцентными группами. Тогда, в за

висимости от типа меток (перекрывания их спектров возбуждения и излучения) и от расстояния между ними, может иметь место большее или меньшее спектральное взаимодействие между ними (синглет-синглетный перенос энергии). Регистрируя изменения в спектрах флюоресценции как меру взаимодействия между метками, можно, таким образом, довольно точно оценивать расстояние между мечеными белками. Этим путем было подтверждено, что белки S7 и S9, S8 и S15, S6 и S18, S20 и S16 / S17 находятся очень близко друг к другу (по-видимому, в непосредственном контакте). Близко друг к другу, согласно измерениям, расположены белки S4 и S20, S4 и S16/S17, S13 и S19 и некоторые другие. Далеко друг от друга оказались метки белков S4 и S18, S4 и S19, S13 и S16/S17, S15 и S19, S19 и S20 и др.

белки, соединенные сплошной линией, сшиваются коротким реагентом (самый непосредственный контакт); белки, соединенные пунктиром, сшиваются более длинными реагентами; группы белков, обведенные сплошной линией, имеют соседние места связывания на последовательности рибосомной РНК; три группы белков, обведенные пунктирной линией, соответствуют трем доменам РНК и трем морфологическим долям частицы

Другой путь измерения расстояний между белками основан на использовании нейтронного рассеяния рибосомными частицами с избирательно дейтерированными парами белков. Так как протонированные белки и дейтерированные белки по-разному рассеивают нейтроны, то из сравнения рассеяния от немеченых и меченых частиц можно выделить вклад именно дейтерированной пары, а из него оценить как расстояние между центрами масс двух белков, так и степень вытянутости (компактности) каждого белка in situ. Подбирая состав растворителя (соотношение H2O/D2O) так, чтобы скомпенсировать рассеяние от протонированного белка, можно еще более усилить видимый вклад дейтерированной пары. Используя измеренные расстояния между центрами масс белков в многочисленных дейтерированных парах, Р. Мур и Д. Энгельман с сотр. применили геодезический метод триангуляции для построения моде

страница 43
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136

Скачать книгу "Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка" (3.76Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
кровать каркас 120
шашечки для такси купить в москве
уличное оборудование для детских площадок в детском саду
лента светодиодная самоклеющаяся

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.04.2017)