химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

(2—

3 мл). Если материал богат хлорофиллом и каротинои-дами, то сгущенную вытяжку несколько раз взбалтывают с петролейным эфиром. Эфирный раствор пигментов

228

сливают, а остатки растворителя удаляют на водяной бане при 50—60°.

Сгущенную вытяжку количественно переводят в мерную колбу на 5 или 10 мл. Для осаждения белков и других примесей прибавляют по каплям раствор уксуснокислого свинца. Проверив полноту осаждения, раствор в колбе доводят до метки, затем фильтруют или, еще лучше, центрифугируют. Для осаждения избытки свинца, не взшедшего в реакцию, добавляют одну каплю насыщенного раствора сернокислого натрия и снова центрифугируют или фильтруют.

Нарезают полосы хромато-графической бумаги длиной 50—55 см и шириной 13—19 см или другого размера (в зависимости от диаметра хроматогра-фической камеры). Бумагу разлиновывают графитовым карандашом, оставляя с одной стороны листа одну, а с другой — две контрольные полосы шириной 2— 2,5 см (рис. 16).

Низ хроматограммы вырезают зубцами, что способствует равномерному скапыванию растворителя н предотвращает наблюдающийся иногда перекос пятен. Затем на линию старта отдельными пятнами по одному на основной части хроматограммы и на каждой из контрольных полос наносят с помощью микропипетки или

капилляра определенный точный объем испытуемого раствора (например, по 0,01; 0,02 или 0,03 мл в пятно). Количество экстракта, наносимого в пятно, должно соответствовать примерно 30—50 мг сырого веса исследуемого материала в том случае, если в нем содержится 5—7 мг глюкозы, фруктозы и сахарозы на 1 г сырого веса ткани. Для установления оптимальной концентрации сахаров, вносимых в пятно, ставят отдельно две

229

контрольные хроматограммы с нанесением различных объемов опытного экстракта (0,01—0,04 мл в пятно). На те же полосы наносят также и метчики — растворы Сахаров (по 0,004 мл 2%-ных растворов).

После нанесения растворов на бумагу приступают к разделению сахаров в соответствующей смеси растворителей (н-бутанол — пиридин — вода, 6:4:3; к-бута-нол — уксусная кислота — вода, 4:1:5). Хроматография нисходящая. Продолжительность разделения 2—3 суток.

После разделения хроматограммы высушивают в токе воздуха (в вытяжном шкафу) до полного удаления следов растворителя. Следующей задачей является определение положения пятее на основной части хроматограммы, так как сахара элюируют из непроявленной части бумаги. Для этого от основной хроматограммы отрезают контрольные полосы я, и' и б и опрыскивают две из них, например а и б, проявителями на кетозы

Г

орцинфосфатом или раствором мочевины), а полосу • проявителем на альдозы (анилинфтялятом или анилиноксалатом).

Полосу, опрыснутую резорцинфосфатом, прогревают 3—4 мин. в сушильном шкафу при температуре 85—95". Пятна фруктозы, сахарозы, раффинозы и олигосахаридов, содержащих фруктэзу, окрашиваются в интенсивно розовый цвет.

При нагревании хроматограммы, опрыснутой раствором мочевины, в течение 5 мин. при 105" пятна к егоз принимают синее окрашивание.

Полосу, обработанную раствором анилинфталата или анилиноксалата, нагревают при 105—110е. При обработке хроматограммы анилинфталатом глюкоза и галактоза проявляются в течение 5 мин. при 105° в виде желтовато-коричневых пятен; пятна пентоя вишнево-красного цвета. Мальтоза и лактоза дают желто-коричневые пятна при нагреваиии в течение 20 мин. при 105е. При проявлении анилиноксалатом (110°, 5—6 мин.) пятна альдоз имеют коричневое окрашивание.

Проявленные контрольные полосы в, о' и б прикладывают к основной части хроматограммы (в) и таким образом определяют положение пятен отдельных Сахаров на полосе в, не проявляя ее. Участки бумаги, содержащие нспрояпленные пятна глюкозы, фруктозы, саха230

розы и олигосахаридов, вырезают, разрезают на маленькие кусочки («лапшу») и элюируют сахара водой три раза но 30 мин. при 60—70°. Элюаты фильтруют через маленькие бумажные фильтры, выпаривают на водяной бане до небольшого объема, снова фильтруют и доводят до определенного объема.

В растворе определяют содержание сахара с помощью антронового реактива.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ (по Хягедоряу — Иеисеиу)

Общее содержание сахаров в крови здорового человека составляет 0,08—0,12%- '(в том числе глюкозы 0,06 0,1%).

'-V

Г*

нт

ю

неон I

Для количественного определения глюкозы в крови чаще всего пользуются микрометодом Хагедорна — Иен-сена. Суть его состоит в том, что глюкоза окисляется жслсзосинеродистым калием (красной кровяной солью) в щелочной среде до глюконовой кислоты, при этом красная кровяная соль восстанавливается до желтой (желе-зистосинеродистого калия).

тт.

неон

+2К,Ге(С$, + Нг0

ню I

тон'

наш I

топ

Реакция доходит до конца лишь в присутствии ионов 2п2+. Образуется нерастворимый цинк — железистосинеродистый калий

2K4Fe(CN) 6+3ZnS04=KsZnsIFe (CN)eb+3K2S04. Избыток ж ел ез и егоси нерод истого калия, не израсходованный на окисление глюкозы, определяется иодом стри-ческим путем

231

2K3Fe (CN) 6+2K1+8CHSC00H = =2K«Fe (

страница 74
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
обучение обслуживанию кондеционеров
Установка сигнализаций Magic Systems с автозапуском и GSM
дизайн и декорирование жилых помещений обучение
пружины для кдм

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)