химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

небольшой тигель, прибавляют немного азотнокислого калия и углекислого натрия в порошке, перемешивают с сухим остатком и сплавляют па небольшом огне. Сплав растворяют в 2 мл азотной кислоты, растирая палочкой. К раствору добавляют 2 мл молибденового реактива и нагревают. Выпадет желтый осадок фосфорно-молибденопокислого аммония.

Разделение фосфолипндов методом тонкослойной хроматографии (по-прописи М. И. Прохоровой и 3. Н. Тупиковой). В последние годы широкое распространение получил метод распределительной хроматографии в тонком слое адсорбента на стеклянных пластинках, названный тонкослойной хроматографией. Этот метод, предложенный советскими исследователями Н. А. Измайловым и М. С. Шрайбером в 1938 г., отличается быстротой выполнения и простотой, не требует сложной аппаратуры.

Применяют два варианта метода: с закрепленным (с помощью фиксатора) и незакрепленным слоем адсорбента на пластинке. Адсорбентом служит силикагель, отечественного производства (марки КСК), к которому в качестве фиксатора добавляют медицинский гипс, рисовый или маисовый крахмал и воду.

Для качественного разделения фосфолипидов применяют стекло с гладкой поверхностью (зеркальное; стекла от фотопластинок; предметные). Размеры стекол: 3X9 см или 4x18 см.

Готовят смесь силикагеля с гипсом и водой. На 1 см2 пластинки берут 12,5—15 мг силикагеля, 1—1,2 мг гипса и 0,03—0,04 мл воды, Силикагель измельчают на шаровой мельнице и просеивают через сито с отверстиями в 60 мкм. К адсорбенту добавляют также раствор родамина G-6, с которым фосфолипиды образуют комплексные соединения, флуоресцирующие в ультрафиолетовых лучах. К 54 мл воды прибавляют 0,0011 г родамина G-6.

Силикагель, гипс и воду (в указанных соотношениях) тщательно смешивают в ступке (лучше агатовой) и однородную массу шпателем наносят на стеклянные пластинки, следя, чтобы слой адсорбента был равномерным, без пузырьков. Пластинки оставляют (в строго горизонтальном положении) на воздухе (при 20—28Г'С) на 20 —

178

25 мин., после чего для активирования адсорбента нагревают при 105° С в' течение 30 мин. или при 80° —45— 60 мин.

Хроматографическая камера представляет собой стеклянный сосуд любой формы (удобнее всего — четырехугольный) с плоским дном и пришлифованной крышкой.

Фосфолипиды растворяют в смеси хлороформа с бутиловым спиртом (2 : 1). На расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки намечают стартовую линию, на которую с помощью микропипетки (объемом 0,1 мл) или капилляра наносят раствор липидов в виде точек, отстоящих друг от друга на 1 см. Раствор наносят осторожно, стараясь не нарушить слоя адсорбента. Лучшие результаты получаются, если нанести на пластинку не более 1 мг фосфолипидов'.

Пластинку ставят в вертикальном «положении. На дно камеры наливают растворитель в таком количестве, чтобы нижний край пластинки был погружен в жидкость на 5 мм.

При тонкослойной хроматографии фосфолипидов чаще всего употребляют следующие растворители: а) хлороформ— метиловый спирт — 7 н аммиак (60 : 35:5 по объему); б) хлороформ—метиловый спирт — уксусная кислота — вода (50 : 25 : 8 : 4); в) хлороформ — метиловый спирт—вода (65:25:4). Для насыщения воздуха I камеры парами растворителя внутри сосуда укрепляют куски фильтровальной бумаги, смоченной растворителем. Камеру закрывают пришлифованной крышкой (в роли крышки может выступать хорошо пришлифованная к стенкам стеклянная пластинка). Разделение фосфолипидов производят до тех пор, пока жидкость не поднимется па высоту 7—8 см (на пластинках 3x9 см) или 10—12 см (на пластинках 4X18 см). Обычно оно продолжается около 20—25 мин. По истечении указанного времени пластинку вынимают из камеры и просматривают в ультрафиолетовых лучах (в ультрахимископе): фосфолипиды, содержащие серии и инозит, проявляются в виде пятен лилового или синего цвета; пятна фосфатидов, в состав молекул которых входят холи и и этаноламин (коламин), дают желтую или желто-оранжевую флуоресценцию.

Если при формировании массы адсорбента не был добавлен родамин (1-6, то еще влажные пластинки, вынутые из камеры, можно опрыскивать 0,03%-ным раствором

j 179

родамина G-6 или родамина В в 95%-ном этиловом спирте и просматривать в ультрафиолете.

Кроме родамина, применяют также следующие проявители:

а) Нары иода. Высушенную при комнатной температуре пластинку помещают на 1 мин, в герметически закрываемый сосуд с парами иода.

б) Железо-сульфосалициловый реактив. В 25 мл воды

растворяют 7 г сульфосалициловой кислоты и 0,1 г хлорного железа, л осле чего раствор доливают до 100 мл

95%-иым этиловым спиртом. Он является реагентом на

фосфатные группы.

в) Молибденовую кислоту. 3 г молибденовокислого

аммонии; растворяют в 50 мл воды, добавляют Б мл 6 н

соляной кислоты н 13 мл 70%-ной перхлорной кислоты.

Пластинки, вынутые из камеры, высушивают при комнатной температуре, опрыскивают раствором проявителя и прогревают 10 мин, при 80° С. Фосфатиды проявляются в виде синих или серовато-синих пятен.

Пользуются также частными проявителями, с помощью которых м

страница 58
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы кондиционерщика в люберцах
несветовые буквы цена
спектакли театра новая опера
бывает ли автобус на 20 мест у мерседеса?

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(16.12.2017)