химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

но готовить также из двухзаме-щениого фосфорнокислого натрия. В этом случае 64,5 г Na2HP04- I2II2O растворяют в 500 мл дистиллированной воды (предварительно прокипяченной для освобождения от С02 и остуженной), раствор количественно переносят в мерную колбу на 1 л, добавляют 7,2 г едкого натра, после растворения которого раствор доводят водой до метки; д) воротный буфер (рН 8,8): 28,6 г буры (тетра-борнокислого натрия) растворяют в 750 мл воды (в мерной колбе на 1 л), прибавляют 50 мл нормального раствора соляной кислоты и доводят водой до метки; с) суспензия фосфорнокислой меди в боратом буфере: 100 мл раствора хлорной меди смешивают с 200 мл раствора трехзамещенного фосфорнокислого натрия и добавляют 200 мл боратного буферного раствора. Суспензию готовят не более чем на один день, лучше

148

всего перед употреблением; ж) тимолфтлеин: 0,25 г индикатора растворяют в 100 мл 50%гного этилового спирта; з) тиосульфат натрия, гипосульфит (Na2S2OsX XSIIjO), 0,1 н раствор. Перед употреблением из него готовят 0,01 н раствор; и) крахмал, 0,5%-ный раствор; к) йодистый калий (KJ), 10%-ный раствор. Готовят перед употреблением; л) уксусная кислота, концентрированная; м) трихлоруксуснан кислота, 10%-ный раствор; н) едкий натр, 1 н раствор.

Нумеруют четыре конические колбы емкостью по 60 мл. Во все колбы вносят по 2 мл раствора панкреатина. В колбах 3 и 4 нагреванием в кипящей водяной бане в течение 5 мин. разрушают ферменты, в колбах 1 и 2 остаются активные ферменты.

В колбы 1 и 3 пипеткой вносят по 20 мл раствора желатина, в колбы 2 и 4 — по 20 мл дистиллированной воды. Растворы во всех колбах перемешивают и немедленно отбирают из каждой колбы по 2—5 мл смеси в мерные колбы на 25 мл для определения азота аминокислот.

В каждую мерную колбу еще до внесения смеси наливают по 2 мл 10%-ного раствора трнхлоруксусной кислоты для инактивирования ферментов. В первую очередь добавляют трихлоруксусную кислоту в колбу 1.

В растворах, внесенных в мерные колбы, определяют содержание азота аминокислот.

Все исходные смеси (в конических колбах) ставят на 1 ч в термостат при температуре 38° С.

Для определения азота аминокислот в каждую мерную колбу прибавляют 2 капли раствора тимолфталеина и по каплям 1 и раствор едкого натра до светло-голубого окрашивания (рН 10,2). К нейтрализованным растворам доливают по 10 мл суспензии фосфорнокислой меди и тщательно перемешивают. Если весь объем суспензии прореагировал, добавляют еще 5 мл.

Колбы доводят водой до метки, хорошо перемешивают и смесь фильтруют (через фильтр из плотной бумаги) или центрифугируют. Фильтрат (или центрифугат) должен быть совершенно прозрачным.

Примечание. В случае необходимости фильтрат (центрифугат) можно оставить на следующий день (в темном и холодном месте).

В две конические колбы пипеткой вносят по 10 мл фильтрата, прибавляют по 0,5 мл уксусной кислоты и

14S

5 мл раствора йодистого калия (или 0,5 г порошка KJ), выделившийся иод тотчас же оттитровывают 0,01 и раствором тиосульфата натрия (гипосульфита). Раствор

тиосульфата добавляют до тех пор, пока окраска жидкости в колбе не станет светло-желтой, после чего приливают 5—6 капель раствора крахмала и дотитровывают тиосульфатом до обеспечивания синей окраски.

На основании результатов титрований вычисляют содержание азота аминокислот во всем объеме каждого из исходных растворов (в конических колбах). Данные, характеризующие содержание а минного азота в колбах 2 или 4, будут указывать на количество свободного азота аминокислот в 2 мл ферментного препарата (раствора панкреатина). Разность в содержании азота аминокислот в колбах 3 и 4 указывает на количество азота свободных аминогрупп в 20 мл раствора желатина. Разность в содержании а минного азота в колбах 1 и 2 (1-2) должна быть практически такой же, как и в колбах 3 и 4 (3-4).

После часа инкубации колбы вынимают из термостата и повторяют определения аминного азота. Данные анализа пересчитывают на исходный объем смеси — 22 мл (2 мл раствора панкреатина + 20 мл раствора желатина иди воды).

Разность между содержанием аминного азота в колбах 3 и 4 должна быть такой же, как и до инкубации, разность же между колбами 1 и 2 должна возрасти после инкубации по сравнению с той же величиной в начале опыта.

Иногда наблюдаются случаи, когда содержание азота аминокислот в колбе 2 после инкубации оказывается более высоким, чем в колбе 4. Это свидетельствует о самопереваривании (автолизе) ферментного препарата.

Рассмотрим следующий пример расчета.

В коническую колбу внесли 2 мл раствора панкреатина и 20 мл раствора желатина; оттуда в мерную колбу для определения аминного азота отобрали 2 мл смеси. После фильтрования были отобраны две пробы по 10 мл прозрачного фильтрата, на титрование которых израсходовали соответственно 1,92 и 1,96 мл 0,01 н раствора тиосульфата натрия (среднее — 1,94 мл).

1 мл 0,01 н раствора тиосульфата натрия (гипосульфита) соответствует 0,28 мг азота аминокислот.

150

Количество азота аминокислот (мг) в объеме мерной колбы

страница 48
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
автомобильные градусники
fissler cirrus цена
привлечение к работе несовершеннолетних
поставщики ручек для дверей

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)