химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

онтрольный образцы оттитровывают 0,2 и раствором едкого натра до появления интенсивного синего окрашивания.

Определение азота аминокислот медным способом. Описано ниже, в работе «Гидролитическое расщепление белка ферментами поджелудочной железы» (см. с. 146).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СВОБОДНЫХ АМИНОКИСЛОТ В МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ

ХРОМАТОГРАФ И И (по Г. В. Колобшотскому)

Общие сведения — см. работу «Разделение фосфоли-пидов методом тонкослойной хроматографии».

Разделение аминокислот в тонком слое силикагелн продолжается 1,5—2 ч, т. е. происходит в несколько раз быстрее, чем при хроматографии на бумаге. Чувствительность тонкослойной хроматографии в 5—10 раз выше бумажной.

Разделение аминокислот мышечной ткани проводят методом двухмерной восходящей хроматографии во взаимно перпендикулярных направлениях.

Реактивы и оборудование: а) хроматогра-фические пластинки со слоем силикагеля «КСК» с добавлением 5—/0% гипса. Подготовка силикагеля: силика» гель «ДСК» измельчают в течение 4—5 ч в шаровой мельнице, отбирают однородную фракцию с частицами 2,5—7,5 мкм и высушивают при 105° С до постоянного веса. Подготовка гипса: порошок гипса просеивают через капроновое сито Д*к 64, после чего выдерживают 1 — 2 суток в сухожаровом шкафу при температуре 180" С; хранят в банке с притертой пробкой. Подготовка хромя-тографических пластин: в ступке тщательно растирают 0,3 г силикагеля, 0,03 г гипса с 3 мл дистиллированной воды; суспензию выливают на гладкую обезжиренную стеклянную пластинку длиной и шириной по 6 см, толщиной 2 мм. Пластинку кладут на строго горизонтальную поверхность и высушивают на воздухе в течение

143

12—14 ч, предохраняя от пыли; б) хроматографические сосуды. Берут батарейные стаканы высотой 13 см, диаметром 7 см и плоским дном внутри, с пришлифованной стеклянной крышкой (пластиной); внутреннюю поверхность стаканов на 75% по окружности покрывают фильтровальной бумагой; в) градуированные стеклянные капилляры на 0.001 мл; г) стеклянный горизонтальный столик для хроматографических сосудов; д) хлороформ, перегнанный при 61" С; е) метанол, перегнанный при 67° С; ж) аммиак. 25%-ный раствор; з) фенол, перегнанный при 182,7° С; и) нингидрин, 0,5%-ный ацетоновый раствор; к) система растворителей I; хлороформ — меганол — 25%-ный водный аммиак, 5:3:1; л) система растворителей П: фенол — вода, 3:1.

Приготовление вытяжки из мышечной ткани. 1 г мяса тщательно растирают в ступке. Гомогенат переносят в центрифужную пробирку. Ступку ополаскивают несколькими миллилитрами 90%-ного этанола и вливают в ту же пробирку, общий объем жидкости в которой доводят этанолом до 10 мл. Содержимое пробирки перемешивают, после чего ее ставят в штатив на 10—20 мин., затем центрифугируют в течение 15 мин. при 3000 об/мин. Центрифугат сливают в небольшую выпарительную чашку, к осадку в пробирке добавляют 10 мл 96%-ного этанола, снова центрифугируют 10 -12 мин. и сливают в ту же чашку.

Объединенный центрифугат выпаривают досуха на водяной бане. К остатку добавляют 3 мл воды, переносят в пробирку и для освобождения от лжшдов взбалтывают 2—3 раза с диэтиловым эфиром. Эфирный слой осторожно отсасывают с помощью капилляра и водоструйного насоса. Водный слой выпаривают на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл воды.

Хроматография. На пластинку со слоем адсорбента на расстоянии 1 см от края наносят с помощью капилляра каплю вытяжки.

Хроматографические сосуды ставят на горизонтальный стеклянный столик или другую строго горизонтальную поверхность и наливают систему растворителей I на высоту 0,5 см, потом вертикально устанавливают хрома-тографнческую пластинку, чтобы часть ее ниже нанесенного пятна находилась в жидкости. Сосуд закрывают пришлифованной крышкой.

144

После того как растворитель поднимется но пластинке на 5 см, ее вынимают и переносят на 2—4 мин. в сушильный шкаф при температуре 105—110°. Высушенную пластинку снова ставят в тот же растворитель, затем высушивают. Описанную операцию повторяют три раза, после чего через слой адсорбента однократно пропускают систему II: пластинку переносят во второй сосуд и устанавливают в положение, перпендикулярное к тому, при котором производилось разделение аминокислот в системе растворителей I. Воздух в сосуде насыщают парами аммиака. Для этой цели на дно его ставят фарфоровый тигель или чашечку с 2%-ным раствором аммиака.

При разделении аминокислот во втором направлении хроматографию также ведут до тех пор, пока растворитель не поднимется по пластинке на 5 см, тогда ее вынимают, высушивают при 105° С до полного исчезновения запаха фенола (под тягой?). Высушенную пластинку опрыскивают раствором нингидрина и снова прогревают в течение нескольких минут в сушильном шкафу при 100—105° С. На пластинке появляются пятна аминокислот красновато-фиолетового или сине-фиолетового цвета.

Идентификация аминокислот. Для идентификации сопоставляют расположение пятен аминокислот на хро-матограмме испытуемого раствора с пятнами, которые получаются в результате нанесения на адсорбент ра

страница 46
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Fresh&Easy
Фирма Ренессанс: к 001 лестница- быстро, качественно, недорого!
падение с моноколеса при отказе гироскопа
обучение корел в новосибирске

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)