химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

яют в единицах оптической плотности на 1 г ткани за 1 мин.

130

Раздел V

ОБМЕН АМИНОКИСЛОТ, ПЕПТИДОВ И БЕЛКОВ

КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО КОЛИЧЕСТВА АЗОТА

Среднее содержание азота в белках составляет 16%. Для пересчета общего количества азота на белок нужно найденное количество общего азота умножить на коэффициент 6,25. При исследовании зерна и продуктов его переработки принят псрссчстиый коэффициент 5,70, молока и молочных продуктов — 6,38.

При определении содержания общего азота в биологическом материале получают величину, которая характеризует общее количество азотсодержащих соединений (белков, нуклеиновых кислот, амидов, аминокислот, кре-атинина, креатина, мочевой кислоты, аммонийных солей, аммиака, солей азотной и азотистой кислот и др.) в исследуемом объекте. Умножая ее на пересчетный коэффициент, получают представление о содержании не чистого белка в продукте, а. так называемого «сырого протеина», поэтому при более точных исследованиях наряду е определением количества общего азота следует также изучить содержание белкового азота, азота аминокислот и амидов и т. д.

Для определения общего азота продукт минерализуют нагреванием с концентрированной серной кислотой при участии катализаторов (сернокислой меди, ртути, селена и др.) и окислителей (пергидроля, марганцовокислого калия). При этом углерод и водород окисляются до двуокиси углерода и воды, а азот отщепляется в виде аммиака

R -CHNH2—СООН + H2SO«~C02+NHa + Н20 + S02. Аммиак далее реагирует с серной кислотой 2NH3+H2S04= (NH<)2S04.

132

Аммонийные соли (или аммиак) взаимодействуют с реактивом Неослсра, образуя иодид меркураммоння, окрашенный в желто-бурый цвет.

Реактив UoOuS

нвеслера мерщшннатю

Интенсивность окраски пропорциональна содержанию аммиака в растворе, что позволяет применить эту реакцию для количественного определения содержания общего азота в биологическом материале.

Реактивы: а) реактив Несслера (двойная соль йодистой ртути и йодистого калия в растворе едкого кали или натра). Используется готовый или приготавливается лаборантом по такой прописи; в 20 мл воды растворяют 10 г двуиодистой ртути (Hgb) и 8 г подпетого калия. Образуется комплексное соединение, В 80 мл воды отдельно растворяют 20 г едкого натра. Оба раствора после остывания сливают в один сосуд и фильтруют через стеклянную вату; б) серная кислота, концентрированная (Р'2о= 1,836); в) пергидроль; г) едкий натр, 0,25 н раствор; д) стандартный раствор: навеску 0,7643 г химически чистого хлористого аммония (NH«CI) или 0.9429 г химически чистого сернокислого аммония ((NH^jSOt) вносят в мерную колбу на 1 л, растворяют в 20—30 мл дистиллированной воды, свободной от аммиака, и той же водой доводят до метки. Получают так называемый основной раствор. 10 мл основного раствора пипеткой вливают в литровую мерную колбу и доводят до метки дистиллированной водой, свободной от аммиака. Получают рабочий стандартный раствор, 1 мл которого соответствует 0,002 мг азота; е) дистиллированная вода, освобожденная от аммиака: дистиллированную воду слабо подкисляют серной кислотой и вторично перегоняют, отбрасывая первую и последнюю порции.

Продукт, подлежащий исследованию, тщательно, измельчают. Навеску измельченного продукта в 0,03—0,08 г вносят в пробирку из термоустойчивого стекла (диаметром 15 мм), куда добавляют 2 мл концентрированной серной кислоты и 1—2 капли пергидроля. Удерживая в

ш

наклонном положении (с помощью держателя), пробирку нагревают на слабом огне. В течение 2—3 мин. обычно происходит обесцвечивание жидкости. При дальнейшем нагревании бесцветная и прозрачная жидкость не должна желтеть. Если же она принимает желтое окрашивание, то это свидетельствует о неполном сожжении органических веществ. В этом случае содержимое пробирки охлаждают, добавляют еще 1—2 капли пергидроля и снова нагревают на медленном огне. Всего расходуют не более 4—5 капель пергидроля.

При минерализации органических веществ избегают бурного кипения жидкости.

После того как все органические вещества окислились, на что указывает устойчивое обесцвечивание жидкости, содержимое пробирки количественно переносят в мерную колбу на 100 мл, на дно которой заранее наливают 10—15 мл воды, освобожденной от аммиака. После охлаждения мерную колбу доводят до метки той же водой.

Пипеткой отбирают из мерной колбы 10 мл раствора, добавляют 3 капли раствора фенолфталеина и оттитро-выпают 0,25 н раствором едкого натра до появления устойчивого слаборозового окрашивания. Затем той же пипеткой снова отбирают из мерной колбы 10 мл раствора, вносят в другую мерную колбу на 100 мл и добавляют столько же 0,25 н раствора едкого натра, сколько было израсходовано на нейтрализацию кислоты при предварительном титровании (фенолфталеин не прибавляют), после чего раствор в колбе доводят водой до метки и тщательно перемешивают. Раствор используется для определения содержания общего азота.

Берут две мерные колбы на 100 мл. В одну из них пипеткой вносят 10 мл испытуемого раствора, в другую — 10 мл раб

страница 42
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
свадебный букет с пионами
Рекомендуем компанию Ренесанс - купить лестницу на второй этаж железную - продажа, доставка, монтаж.
кресло метро
ремонт складов

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)