химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

с, для чего вытяжку

после центрифугирования дополнительно разводят ацетатной буферной смесью.

Активность фермента (А) рассчитывают по формуле

где Е — экстинкция, равная 0,125; а — отношение количества буферной смеси, взятой для экстрагирования фермента (мл), к навеске растительной ткани (г); б—степень дополнительного разведения вытяжки после центрифугирования; в — степень постоянного разведения вытяжки в кювете; с — толщина слоя в кювете фотоэлектроколориметра (2 см); t — время, с.

J28

Определение активности полифенолок-сидазы (г? - д и ф с н о л о к с и д а з ы, т и р о з и н а з ы, катехолоксидазы) (по А. Н. Бонркину). Фенольные соединения — важные компоненты окислительно-восстановительных процессов. Окисляясь кислородом воздуха, они превращаются в хиноны. Реакция катализируется ферментом полифенолоксидазой (о-дифенолок-сидазой, тирозиназой, катсхолоксидазой). Схематически эта реакция может быть представлена так:

фенол + Of = хинон+Н^О.

Хиноны подвергаются восстановлению водородом дыхательного субстрата до фенолов, которые снова включаются в реакцию окисления, протекающую при участии фермента.

Полифенолоксидаза действует на полнфенолы, о-ди-фенолы, монофенолы, дубильные вещества. Фермент катализирует также окисление аминокислоты тирозина с образованием темноокрашенных продуктов меланинов.

Система, «иолифенол**хинон» играет видную роль в дыхании растений, являясь промежуточным звеном при окислении многочисленных органических соединений (в том числе аскорбиновой кислоты).

При количественном определении активности поли-фенолоксидазы измеряют скорость реакции окисления диметилпарафенилендиамина с образованием продукта, окрашенного в сине-фиолетовый цвет.

Реактивы и приборы: а) диметил-парафени-лендиамин, 0,02%-ный раствор на 0,01 н растворе щавелевой кислоты; б) щавелевая кислота, 0,01 н раствор; в) пирокатехин, I % -ный раствор на 0,01 н растворе щавелевой кислоты; г) фосфатная буферная смесь, рН 7,4 (см. прнл. 12); д) фотоэлектроколориметр, ФЭК-М или ФЭК-Н-57; е) секундомер; ж) центрифуга.

Навеску растительной ткани (0,5—1 г) берут на аналитических весах. Ее тщательно растирают в ступе с фосфатной буферной смесью, затем количественно переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят буфером до метки. Взвесь центрифугируют (4000 об/мин) или фильтруют.

В две кварцевые кюветы фотоэлектроколориметра (толщина слоя 2 см) вносят по 2 мл центрнфугата (или фильтрата), 2 мл дистиллированной воды и 2 мл раствора диметил-парафенилендиамина. Нулевую точку при5 Д. К. Шапиро 129

бора устанавливают при красном или оранжевом светофильтре (^=590—625 нм), после чего правым барабаном отводят стрелку гальванометра в крайнее правое положение (Я—0,125). В контрольную левую кювету прибавляют 2 мл раствора щавелевой кислоты, а в опытную (правую) кювету — 2 мл раствора пирокатехина и тотчас же включают секундомер. В остальном поступают, как при определении пероксидазы.

Активность нолифенолоксидазы выражают в условных единицах на 1 г растительного материала. Вычисление ведут но формуле, приведенной в работе «Определение активности пероксидазы в растительном материале».

С п с к т р о ф о т о м е т р и ч с с к о е определение активности а с к о р б и н а токе и д а з ы (по Аррп-гони, в прописи Н. П. Ярош, А. И. Ермакова и В. В. Ара-симович). Аскорбинатоксидаза (аскорбнноксидаза) катализирует реакцию окисления аскорбиновой кислоты кислородом воздуха (химизм реакции см. с. 83). Фермент аскорбинатоксидаза широко распространен в растительном мире. Высокой активностью фермента характеризуются капуста, огурцы, тыква, кабачки. Активность яскорбинатокгидазы обычно определяют по количеству аскорбиновой кислоты, превращенной в дегидроформу 1 г ткани за единицу времени.

Аскорбиновая кислота обладает максимумом поглощения света при длине волны Я,—-265 им. Под действием фермента она окисляется. Степень окисления аскорбиновой кислоты пропорциональна активности фермента, ее можно определить по уменьшению оптической плотности раствора.

Реактивы и приборы; а) фосфатная буферная смесь, рИ 7,38 (см. прил. 12); б) хлористый калий (КО), 0,005 М раствор; в) сернокислый магний (MgSO«7HgO), 0,005 М раствор; г) аскорбиновая кислота, 0,005 М раствор; д) спектрофотометр СФ-4, СФ 16, VSU-2P.

Навеску растительной ткани (I г) берут па аналитических весах. Ее тщательно растирают в ступке с фосфатной буферной смесью, после чего количественно переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят буфером до метки. Затем центрифугируют или фильтруют.

В одну из кювет спектрофотометра (опытную) вносят 0,1 мл ферментной вытяжки (центрифугата пли фильтрата), 0,1 мл раствора хлористого калия, 0,1 мл раствора сернокислого магния, 0,7 мл раствора аскорбиновой кислоты и 2 мл фосфатной буферной смеси, во вторую (контрольную) — 2,3 мл буферной смеси и 0,7 мл раствора аскорбиновой кислоты. Сразу же после внесения растворов измеряют оптическую плотность опытной кюветы, потом измерения повторяют через I, 2, 3, 4, 5 мин. Активность аскорбинатоксидазы определ

страница 41
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
напольный бордюр spazio
стоимость дизеля для отопления
бувницы купить дешего
47346-101

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)