химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

ерокси-дазной активностью. Для свежего мяса характерна положительная реакция на пероксидазу, в несвежем мясе она не проявляется или запаздывает.

Реактивы: а) вытяжка из мяса: 10 г фарша свежего мяса заливают 40 мл дистиллированной воды, настаивают 10 мин. и фильтруют: б) бензидин, 0,25%-ный спиртовой раствор; и)перекись водорода, 2%-ный раствор, свежеприготовленный.

К 2—3 мл вытяжки из мяса добавляют 3—5 капель спиртового раствора бензндина и 2—3 капли раствора перекиси водорода. Если мясо свежее, содержимое про125

бирки почти тотчас же принимает зеленовато-синее окрашивание.

Щ+Н&с=ин+гнгв

Определение активности порокеидазы в м ы ш ц а х или к р о в и. В основу метода положена описанная выше реакция окисления бензндина в дифено-хинондиимнн, катализируемая перокепдазой:

Молекула дифенохннондиимнна конденсируется с молекулой бензидина с образованием окрашенного соединения (бензндшгового синего)

СИ СН СИ СН

CM Cfl си си

сн си сн

>с—с\ \с—тг

сн сн сн да

Беюивше§ыв сшш

Реактивы: а) свежи» кровь кролика,разведенная 1:1000, или вытяжка из мышечной ткани: 1 г измельченной свежей мышечной ткани заливают 4—5 мл дистиллированной воды и экстрагируют в течение 30 мин., после чего фильтруют; б) бензидин, 1 % -ный раствор в ледяной уксусной кислоте; в) перекись водорода, 3%ный раствор, свежеприготовленный; г) едкий натр, 30%-ный раствор; д) этиловый спирт, абсолютный; е) марганцовокислый калий, 0,01 н раствор; ж) стандартный раствор: в мерную колбу емкостью 25 мл вносят 2 мл 1 %-ного раствора бен126 зидина (пипеткой с резиновой грушей!), добавляют 3 мг 0,01 и раствора марганцовокислого калия и оставляют на 10 мин., чтобы жидкость приобрела интенсивно-красное окрашивание, затем прибавляют 10 мл 30%-ного раствора едкого натра и доливают до метки абсолютным спиртом. Готовят перед самым определением.

В мерную колбу на 25 мл вносят 2 мл раствора бензидина, 2 мл 3%-ного раствора перекиси водорода и 1 мл вытяжки из мышечной ткани или разведенной крови (1:1000). Колбу встряхивают и ставят точно на 3 мин., после чего в нее приливают 10 мл 30%-ного раствора едкого натра и снова встряхивают. Выпадает окрашенный осадок, который растворяют в абсолютном спирте. Им же доводят содержимое колбы до метки.

Интенсивность окраски испытуемого и стандартного растворов сравнивают в колориметре.

За единицу активности фермента принята активность пероксидазы, при которой в данной реакционной смеси развивается окрашивание, равное по интенсивности окраске стандартного раствора.

Активность фермента (в условных единицах на 1 г ткани) рассчитывают по формуле

где Л, — высота столба стандартного раствора, мм; А2— высота столба испытуемого раствора, мм; 25 — объем раствора в мерной колбе, мл; 5 — суммарный объем реагирующих растворов (бензидина, перекиси водорода и вытяжки из мышечной ткани) в колбе, мл.

Определение активности пероксидазы в растительном материале (по А. Н. Бояркину). Определяют скорость катализируемой пероксидазой реакции окисления бензидина в дифенохиноиднимин с образованием синеокрашенного продукта конденсации последнего с молекулой бензидина (бензндинового синего). Химизм реакции — см. с. 126.

Реактивы и приборы: а) ацетатная буферная смесь рН 4,7 (см. прил. 12); б) раствор бензидина на ацетатном буфере рН 4,7: в мерную колбу емкостью 200 мл наливают 60—80 мл дистиллированной воды, приливают 2,3 мл ледяной уксусной кислоты, после чего всыпают 0,184 г бензидина. Колбу ставят на водяную

127 баню (60°) и, взбалтывая, подогревают до полного растворения бензидпна, затем прибавляют 5,45 г уксуснокислого натрия, взбалтывают до его растворения. Колбу охлаждают до 20" С и доводят до метки дистиллированной водой; в) перекись водорода, 3%-ная; г) фотозлек-троколориметр ФЭК-М, ФЭК-Н 57 или ФЭК-60; д) секундомер; е) центрифуга.

Из средней пробы растительного материала берут навеску 0,2- 0,5 г (в зависимости от предполагаемой активности фермента), тщательно растирают ее в ступке с

ацетатным буфером. Растертую массу переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки, после чего центрифугируют при 4000—5000 об/мин (или фильтруют).

В две кварцевые кюветы фотоэлектроколориметра (толщина слоя 2 см) вносят по 2 мл центрнфугата (или

фильтрата), 2 мл раствора бензндина и 2 мл дистиллированной воды. Измерения ведут при красном светофильтре (А,=625—700 нм). Устанавливают нулевую точку прибора, затем с помощью правого барабана отводят

стрелку гальванометра в крайнее правое положение

(?=0,125). В левую кювету быстро добавляют 2 мл воды, а в правую — 2 мл перекиси водорода (с помощью

пипетки с широким отверстием). Вливая первую каплю

перекиси, включают секундомер, поскольку начинается

реакция окисления бензндина, катализируемая пероксидазой. Стрелка гальванометра двигается к нулевому делению шкалы. Как только она достигнет нулевого деления, отсчет времени прекращают. Подбирают такую

навеску материала и разведение вытяжки, чтобы изменение окраски происходило за 30—50

страница 40
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
жб сваи цена
Магазин KNS цифровые решения предлагает AXIS Q6115-E - отправка товаров во все населенные пункты России.
аксессуары для плавания в ижевске
зеркало купить интернет магазин москва

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(29.05.2017)