химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

зом, концентрация амилазы в каждой из пробирок в два раза ниже, чем в предыдущей. Из десятой пробирки 1 мл раствора выливают.

Во все пробирки добавляют еще по 1 мл дистиллированной воды и, начиная с десятой,—по 2 мл раствора крахмала, перемешивая при этом содержимое каждой пробирки. Все 10 пробирок одновременно ставят на 30 мин. в водяную баню, нагретую до 37—38 ° С (внимательно следят за температурой, не допуская ее повышения) .

Через 30 мин. пробирки охлаждают под краном и в каждую из них прибавляют по 2 капли раствора Люголя.

Наблюдают окрашивание жидкости. При полном расщеплении крахмала амилазой жидкость в пробирке будет бесцветной или слабо желтоватой, если расщепления не произошло — жидкость окрашена в синий цвет. В промежуточных пробирках наблюдается гамма переходных оттенков цвета — от синевато-фиолетового до буровато-желтого. Результаты опыта записывают по образцу табл. 5.

Для расчета количества амилазы в слюне учитывают ту пробирку, в которой уже нет синего оттенка (т. е. ту, после которой жидкость во всех остальных пробирках окрашена в синий цвет). Пусть это будет, например, четвертая. В четвертой пробирке неразведенной слюны сопв

Отношение раэвеНомер проверки

Табл. б. Ииледонание активности амилазь

Окраска содержимого прсЛирк"

20

40

80

160

320

640

1280

1560

3120

6240

2 3 4 Б 6 7 8 9 10

" - _ , Люголя

Синего окрашивания нет

Светло-синяя Синяя

держится щмд. Это количество слюны расщепляет 2 мл 0,1%-лого раствора крахмала, а 1 мл неразведенной слюны способен расщепить 320 мл 0,1 % -него раствора крахмала (х =-? '^-^Ь'- ? ~ 320 мл). Активность амилазы слюны (амилокластическую силу) выражают количеством миллилитров 0,1%-ного раствора крахмала, который способен расщепить 1 мл неразведенной слюны в течение 30 мин. при 37—38" С. Амилоклагтическая сила слюны человека составляет в норме 260—320 ед.

СЛг-0-ОСС^

сн-о-осс„«»

СИг-0-0СС,Лз

Определение активности липазы. Липазы катализируют реакцию гидролитического расщепления сложно-эфирных связей в молекулах жира, в результате которой освобождаются глицерин и жирные кислоты:

+3W

снгш

сноп +зс„н„соон

119

Гидролитическую активность липазы можно определить с помощью различных методов; титриметрнческого, ста л а гм о м етр и ческого, колориметрического и ряда других.

Реактивы: а) растительное масло; б) препарат липазы: 10—12 г семян льна, конопли, пшеницы тщательно растирают с кварцевым песком до образования гомогенной массы, которую обрабатывают в ступке пятикратным количеством ацетона в течение 10 мин., растирая пестиком. Кашицеобразную массу центрифугируют. Остаток два раза обрабатывают днэтиловым эфиром, после чего высушивают над серной кислотой в вакуум-эксикаторе в течение 12 ч и растирают в ступке. Перед опытом ферментный препарат растирают с водой в отношении 1 : 10. Для анализа берут 0,1—0,5 мл суспензии; в) едкое кали, 0,1 н раствор; г) ацетатный буфер, рН 4,7. Смешивают равные объемы нормальных растворов уксусной кислоты и уксуснокислого натрия (оптимум действия большинства растительных липаз лежит при рН 4,6—4,9); д) смесь этилового спирта с диэтшювым эфиром (1:1) (готовится перед употреблением); е) фенолфталеин, 1%-ный спиртовой раствор,

В коническую колбу на 50 мл отвешивают на техно-химических весах 2,0—2,5 г растительного масла, к навеске добавляют 2 мл ацетатной буферной смеси, тщательно встряхивают и приливают 0,1—0,5 мл суспензии ферментного препарата, смешанной с 3 мл воды. Смесь в колбе доливают водой до общего объема 8 мл, энергично встряхивают и переносят в аппарат для взбалтывания. Колбу закрывают пробкой и взбалтывают в течение 1 ч при температуре 20° С, затем ее содержимое (с помощью 60 мл нейтрализованной слирто-эфириой смеси) количественно переносят в сухую коническую колбу большего объема. Свободные жирные кислоты, образовавшиеся при гидролитическом расщеплении масла, от-титровывают 0,1 н раствором едкого кали (индикатор — раствор фенолфталеина). Одновременно проводят контрольный опыт с прокипяченной суспензией ферментного препарата.

Активность липазы х выражают количеством миллилитров 0,1 н раствора щелочи, израсходованных для нейтрализации свободных жирных кислот, образующихся при гидролитическом расщеплении 1 г масла:

120 х н

где а — количество ОД н раствора едкого кали, израсходованное на титрование опытного образца, мл; b — то же для контрольного образца; k — поправочный коэффициент 0,1 н раствора едкого кали; « — навеска масла, г.

ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫЕ ФЕРМЕНТЫ (ОКСИДОРРДУКТАЗЫ)

Общие сведения. К классу оксидоредуктаз относится многочисленные ферменты, катализирующие реакции биологического окисления. Это —сложные белки (протеиды), в состав иростетических групп которых входят витамины группы В (рибофлавин, амид никотиновой кислоты и др.), металлы (железо, медь), нуклеотиды.

Роль коферментов в процессах биологического окисления заключается главным образом в переносе электронов от вещества, подвергающегося окислению (донора электронов),

страница 38
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
перчатки forward в махачкале купить
Danish Design IV62Q1131
Baxi FOURTECH 24
Металлические парковые скамейки и лавочки

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)