химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

о проделывают реакции Троммера и с иодом. Убеждаются, что в пробирке, в которой фермент был ииактивирован кипячением, расщепления крахмала не произошло.

Специфичность действия ферментов. Это одно из важнейших свойств ферментов. Каждый фермент воздействует лишь на определенное вещество или группу веществ, близких по своей структуре. Различают следующие виды специфичности: а) абсолютную, когда ферменты катализируют лишь одну реакцию превращения какого-либо вещества. Например, уреаза (карбамид — амидогидролаза) катализирует только реакцию гидролитического расщепления мочевины до аммиака и двуокиси

115 углерода; б) групповую, когда ферментом катализируются реакции превращения близких по своей структуре веществ, построенных по одному типу. Так, сахараза (р-фруктофуранозидаза) катализирует реакцию гидролитического расщепления сахарозы с освобождением молекул глюкозы и фруктозы, но тот же фермент катализирует также реакцию частичного гидролиза трисаха-рида рафииозы (и-галактозндо-а-глюкозидо-р-фруктози-да), при которой освобождается лишь молекула фруктозы, а связь между галактозой и глюкозой остается ненарушенной; в) стерсохимическую, которая проявляется в том, что фермент катализирует реакцию расщепления или синтеза только одного из стереоизомеров, не воздействуя на другой. Окисление /.-молочной кислоты до ни-ровиноградной катализируется ферментом лактатдегид-рогеназой, тогда как тот же процесс у />-молочной кислоты катализируется другим ферментом — ?>-лактатде-гидрогеназой.

Реактивы; а) слюна, разведенная в 10 раз дистиллированной водой; б) сахароза, 1%-ный раствор;

в) крахмал, 1%-ный раствор; г) реактивы для реакции Троммера.

|В две пробирки наливают по 1 мл разведенной слюны, затем в одну из них добавляют 1 мл раствора сахарозы, а в другую — столько же раствора крахмала. Обе пробирки прогревают 10 мин. в водяной бане при температуре 38° С, после чего охлаждают и с содержимым каждой из них проделывают реакцию Троммера. Убеждаются, что амилаза катализировала лишь процесс гидролитического расщепления крахмала и не оказала действия на сахарозу.

Влияние рН среды на активность амилазы слюны. Каждый фермент проявляет максимум своего каталитического действия при строго определенном рН среды. Наивысшую активность многие ферменты проявляют в изоэлектрической точке.

Оптимальное значение рН для пепсина составляет 1,5—2,0, амилазы слюны—6,8—7,0, трипсина— 7,8, липазы поджелудочной железы — 7,0—7,8. Было, однако, показано, что ферменты, катализирующие одни и те же реакции, но выделенные из различных субстратов, проявляют оптимум действия при неодинаковых значениях рН. Так, оптимум действия кишечной сахаразы наблю11С

дается при рН 6,2, а сахаразы, выделенной из дрожжей,— при рН 4,6 5,0. Оптимум рН амилазы слюны составляет 6,8—7,0, а амилаза солода проявляет максимум каталитической активности при рН 4,4—4,5.

Р е активы: а) слюна, разведенная дистиллированной водой в 100 раз; б) крахмал, 0,5%-ный раствор; в) лимонная кислота, 0,1 М раствор (19,212 г кислоты в 1 л); г) фосфорнокислый натрий двузамещенный (Na2HPO4-2Ha0), 0,2 М раствор (содержит 36,62 г соли в I л); д) раствор Люголя (раствор иода в йодистом калии); е) хлористый натрий, 1%-ный раствор.

В 7 однотипных пробирок пипетками наливают растворы лимонной кислоты и фосфорнокислого натрия в количествах, указанных в табл. 4, получая таким образом буферные смеси со значениями рН от 5,6 до 8,0. В каждую пробирку добавляют по 10 капель 1 %-иого раствора хлористого натрия, 0,5%-ного раствора крахмала, разведенной в 100 раз слюны и перемешивают.

Табл. 4. фосфатио-цнтратые буферные

Номер пробирки Количество 0,2 М раствора aiyMtr

та натрии, Ш1 Количество 0,1 М растворе лимонной кислоты, мл рН буферной смеси

1 0,88 0,42 5,6

2 0,63 0,37 6,0

3 0,69 0,3! 6.4

4 0,77 0.23 6,8

5 0,87 0,13 7,2

6 0,94 0,06 7,6

7 0,97 0,03 8,0

Пробирки ставят на 10 мин. в водяную баню при температуре 38° С, после чего быстро охлаждают, добавляют во все пробирки по 1 капле раствора Люголя, перемешивают и наблюдают окраску. Устанавливают, при каком рН произошло наиболее полное расщепление крахмала (желтая или буровато-желтая окраска с иодом). Реакция весьма специфична и показательна.

117

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ГИДРОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ (ГИДРОЛАЗ)

Определение активности амилазы слюны (по Вольге-муту). Определяют предельное разведение фермента, при котором наблюдается полное расщепление крахмала. Метод находит применение в клинической лабораторной практике.

Реактивы: а) слюна. Свежую слюну разводят в 10 раз; б) растор Люголя (см. с. 114); в) крахмал, 0,1%-ный раствор, свежеприготовленный.

Нумеруют 10 пробирок. В каждую из них наливают из пипетки по 1 мл дистиллированной воды. В первую пипеткой вносят 1 мл разведенной слюны. Содержимое пробирки перемешивают, три раза втягивая в пипетку и выпуская. 1 мл раствора из первой пробирки переносят во вторую, повторяют те же операции, затем 1 мл раствора из второй пробирки переносят в третью и т. д. Таким обра

страница 37
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
керамогранит take jet beige 33,3x50 купить в обнинске
гофра мерседес
кухонная утварь интернет магазин
кресло nadir steel chrome

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)