химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

ентрированной соляной

кислоты и воды (130 : 33 ; 37). Используют для разделения свободных пуриновых и пиримидиновых оснований.

В этой смеси разделение происходит медленно. Хроматограммы высушивают на воздухе при комнатной температуре. Для того чтобы удалить следы соляной кислоты,

высушенную хроматограмму выдерживают несколько минут над кипящей водяной баней, а затем снова сушат на

воздухе.

В табл. 3 представлены данные, характеризующие

62 а также нуклеозидов и нуклеотидов в описанных системах растворителей.

Проявители. Проявители реагируют с луриновыми и пиримидиновыми основаниями, пентозами и остатками фосфорной кислоты.

Ультрафиолетовые лучи. Пуриновые и пиримидиновые основания, а также нуклеозиды и нуклеотиды, в состав которых они входят, поглощают ультрафиолетовые лучи в границах 250—280 нм. При просмотре хроматограмм в ультрафиолетовых лучах они становятся заметными в виде темных пятен на светло-голубом флуоресцирующем фоне бумаги. Границы пятен очерчивают графитовым карандашом.

Азотнокислое серебро — дв у хромовокислый натрий. Является реактивом на пуриновые основания. В состав проявителя входят; а) азотнокислое серебро, 2%-ный раствор; б) двухромовокислый натрий (бихромат натрия), 0,5%-ный раствор; в) азотная кислота, 0,5 и раствор.

§з

фон бум

Хроматограмму опрыскивают раствором азотнокислого серебра, после чего погружают в раствор бихромата натрия. Выпадает красный осадок хромата серебра. Затем хроматограмму перенося! в раствор азотной кислоты, в котором происходит медленное растворение осадка. Красная окраска остается лишь в местах комплекса хромата серебра с аденином и гуанином. Если при этом хромате граммы сохраняет еще розовую окраску, агу следует перенести в сосуд с водой и несколько раз прополоскать.

Ртутный проявитель. С его помощью можно открыть пиримидиновые основания — урацил, цитозин, тимин.

Хроматограмму погружают на 30 секунд в раствор, состоящий из 1 части 0,1 М раствора уксуснокислой ртути, 3 частей 1 М раствора уксуснокислого натрия и 6 частей воды. Затем хроматограмму перекладывают на 20 секунд в кювету с проточной водой, после чего сразу же погружают в 2%,-ный раствор сернокислого аммония до появления черных пятен.

Проявитель на фосфорную кислоту. Состоит из четырех компонентов: а) раствор молибдено-вокислого аммония (1 г соли в 8 мл воды); б) соляная кислота, концентрированная; в) хлорная кислота, 12н раствор; г) ацетон. Перечисленные компоненты смешивают в отношении 8:3:3:86 (перед употреблением). Указанной смесью опрыскивают хроматограмму, которую затем высушивают при комнатной температуре и освещают ультрафиолетовыми лучами (кварцевой лампой) в течение 30 мии. Соединения, в состав которых входят фосфатные группы, дают голубые пятна. Голубой оттенок фона можно снять парами аммиака.

Хроматографическая идентификация продуктов гидролиза ДНК- Реактивы и материалы: а) препарат ДНК; б) соляная кислота, 6 н раствор; в) соляная кислота, 0,1 н раствор; г) хроматографическая бумага ватман М 1 или FN1; д) стандартные растворы пуриновых и пиримидиновых оснований (см. с. 62); е) системы растворителей I и П (см. с. 62); ж) проявитель азотнокислое серебро — двухромовокислый натрий; з) ртутный проявитель.

Гидролиз. 5—20 мг препарата ДНК вносят в пробирку, туда же прибавляют 3 мл 6 н раствора соляной кислоты. Пробирку запаивают и помещают в сушильный шкаф при 100° С на 3 ч. Полученный гидролизат досуха испаряют в вакуумном эксикаторе (над твердым КОН). Остаток растворяют в таком количестве 0,1 н раствора соляной кислоты, чтобы получить 4%-ный раствор (учитывая количество ДНК, взятой для гидролиза).

Хроматография. Берут четыре листа хромато-графнческой бумаги размерами 12X40 см. На середину линии старта наносят по 5 мкл исследуемого гидролиза-га, а по сторонам — стандартные растворы пуриновых и пиримидиновых оснований. Раствор гуанина наносят только на лист № 4.

Хроматограммы № 1 и 2 ставят в сосуды с системой растворителей I, а № 3 и 4 — в сосуды с системой П. Хроматографию продолжают до тех пор, пока фронт растворителя не поднимется хотя бы на 20 см (в системе I это продолжается около 3 ч, в системе II — 22—24 ч).

Хроматограммы высушивают (см. выше) и просматривают в ультрафиолетовых лучах. Пятна азотистых оснований очерчивают графитовым карандашом, после чего хроматограммы № 1 и 2 обрабатывают ртутным проявителем, а листы Ш 3 и 4 — проявителем азотнокислое серебро—двухромовокислый натрий. Определяют Rf соединений и с помощью табл. 3 производят их идентификацию.

Хроматографическая идентификация продуктов гидролиза РНК. Реактивы и материалы: а) препарат РНК; б) соляная кислота, 1 н раствор; в)хроматографическая бумага ватман № 1 или FN1; г) стандартные растворы пуриновых и пиримидиновых оснований; д) система растворителей И (см. с. 62); е) проявитель азотнокислое серебро — двухромовокислый натрий;

ж) проявитель на фосфорную кислоту (см. с. 64);

з) проявитель на а-диоловую группу: 1) иоднокислый калий (периода! калия, КЮ,), насыщенный раствор

страница 21
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
детская простыня 170 на 110
cramer в кемерово купить
силиконовые формочки для кексов нижний новгород
фонарь полицейский сву-3 название улицы

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.04.2017)