химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

ч, после чего колбу охлаждают, содержимое ее фильтруют через бумажный фильтр. С фильтратом проделывают перечисленные ниже реакции.

ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОДУКТОВ ГИДРОЛИЗА НУКЛЕОПРОТЕИДОВ

Открытие полипептидов. С частью фильтрата (1 — 2 мл) проделывают биуретовую реакцию.

Открытие пуриновых оснований, К 2 мл фильтрата добавляют концентрированный раствор аммиака до щелочной реакции на лакмус и приливают 1 мл аммиачного раствора окиси серебра. Через несколько минут выпадают хлопья осадка серебряных солей пуриновых оснований.

II I

Открытие пентоз. Открытие пентоз основано на реакции с тимолом и концентрированной серной кислотой (см. с. 47). Серная кислота вызывает дегидратацию пентоз и образование фурфурола, который с тимолом дает соединения красного цвета (продукты конденсация).

~ЗИг0сн

с—с

?И'

(Hcmh

Фурфурол

сн

соединение ' красного цвета

НС

PuSax ЩОн

да

е~да

I (

с—с.

Тимол tbC — C—cflj

57

К 1 мл фильтрата добавляют 2—3 капли 1%-ного спиртового раствора тимола и по стенке пробирки осторожно наслаивают 1 мл концентрированной серной кислоты. Жидкость окрашивается в красный цвет. Окраска более выражена на границе раздела слоев.

Пентозы можно обнаружить также с помощью реакций с орцином, или флороглюцином, или фслинговой жидкостью (см. раздел VII).

Открытие фосфорной кислоты. Фосфорная кислота образует с молибденовым реактивом желтый кристаллический осадок фосфорномолибденовокислого аммония:

Н3РО4+ 12(NH4)2MoOi+21HNOs->-(NHOsPO.- 12Mo03+21NH.N03+ 12Н/).

К 1—2 мл фильтрата приливают равный объем молибденового реактива, нагревают до кипения и кипятят 2— 3 мин. Появляется желтое окрашивание, обусловленное образованием фосфорномолибденовокислого аммония. При стоянии выпадает желтый осадок.

ОЧИСТКА И РАЗДЕЛЕНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ* (по Шмидту и Таннгаузеру, в прописи Г. П. Георгиев»)

Реактивы и материалы: а) селезенка, печень, почки; б) трихлоруксусная кислота, 5—10—50%-ные растворы; в) кали едкое (КОН), 0,5 н раствор; г) этиловый спирт, 95%-ный; д) диэтиловый эфир; е) смесь этилового спирта с диэтиловым эфиром (3 : 1); ж) смесь этилового спирта с хлороформом (3: I); я) хлорная кислота (НСЮ4), 5 н раствор. Раствор готовить осторожно, так как хлорная кислота нестойка и может взорваться при хранении (особенно при повышенной температуре), а также при соприкосновении с органическими веществами.

Процесс выделения, очистки и разделения нуклеиновых кислот состоит из ряда последовательных этапов.

1. 1 г ткани (сырой вес) измельчают в стеклянном гомогенизаторе с 5%-ным раствором трихлоруксусной

* Для студенческого научно-исследовательского кружка.

58

кислоты на холоду до получения однородной тонкой кашицы (гомогенизатор охлаждают льдом), которую, количественно смывая со стенок гомогенизатора 5 мл 10%'Ного холодного раствора уксусной кислоты, переносят в центрифужную пробирку. Центрифугируют 7 мин. (3000—4000 об/мин) в центрифуге с охлаждением или низкотемпературной комнате. Жидкость над осадком сливают, к осадку вновь приливают 5—10 мл 10%-ного холодного раствора трихлоруксусной кислоты и снова центрифугируют. Операцию повторяют в третий раз. Промывные воды соединяют.

В осадке остаются нуклеиновые кислоты, белки и ли-пиды, в промывные воды переходят низкомолекулярные производные азотистых оснований (в том числе нуклео-тиды) и неорганические фосфорные соединения.

Примечание. Все операции необходимо проводить при низкой температуре во избежание отщепления пуринов (ялуринизяции)

и последующего разрыва цепей ДНК при щелочном гидролизе.

2. Осадок освобождают от липидов путем экстракции

органическими растворителями, для чего его растирают

стеклянной палочкой и последовательно центрифугируют

с этиловым спиртом, два раза со смесью спирта с хлороформом (3: 1), затем со смесью спирта с эфиром (3: 1)

и наконец с эфиром. Каждый раз берут по 10 мл растворителя. Промытый осадок высушивают на воздухе; для

ускорения сушки его растирают стеклянной палочкой.

В осадке остаются нуклеиновые кислоты и белки,

3. Производят разделение РНК и ДНК.

При мягком щелочном гидролизе РНК расщепляется до нуклеотидов, тогда как ДНК остается полимерной и выпадает в осадок при добавлении кислоты (хлорной или трихлоруксусной).

. К высушенному на воздухе и растертому в порошок осадку добавляют 5—10 мл 0,5 н раствора КОН и ставят на 15—18 ч в термостат при 37° С, после чего охлаждают до 0—2° и добавляют холодный 5 н раствор хлорной кислоты (НПО<) из расчета 0,2 мл раствора на каждый миллилитр гидролизата.

Примечание. Вместо взрывоопасной концентрированной хлорной кислоты лучи» использовать 50%-ный раствор трихлоруксусной, который добавляют к гидролизату с таким расчетом, чтобы довести концентрацию кислоты в нем (после нейтрализации КОН) до 5%.

59

После добавления кислоты гидролизат в течение 5 мин. выдерживают в холодильнике при 0° С и затем центрифугируют.

В надосадочной жидкости содержатся нуклеотиды, которые освободились при гидролитическом расщеплении РНК. Надосадоч

страница 19
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы механик холодильного оборудования
шкаф 4-х дверный
купить кастрюлю из нержавеющей стали германия
Zanussi Parma

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.01.2017)