химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

ляется в виде спирализации второго порядка (например, в хромосомах) либо клубков двойных спиралей.

ВЫДЕЛЕНИЕ ДЕЗОКСИРИООНУКЛЕОПРОТЕИДОВ

ИЗ ПЕЧЕНИ ИЛИ СЕЛЕЗЕНКИ

Нуклеопротеидами богаты печень, селезенка, поджелудочная железа, почки, дрожжи. Они растворяются в разбавленных растворах щелочей и выпадают в осадок при подкислеяии раствора. Дезоксирибонуклеопротсиды хорошо растворяются также в солевых растворах.

Реактивы и материалы: а) печень или селезенка крупного рогатого скота или свиньи, свежие или замороженные; б) хлористый натрий, 5%-ный раствор; в) деревянная палочка с насечками.

2—2,5 г печени или селезенки разрезают на маленькие кусочки и затем растирают в ступке с 5%-ным раствором хлористого натрия, добавив немного стеклянного порошка. Раствор соли добавляют небольшими порциями (по 10—15 мл), всего расходуют его около 80 мл.

Растирают 12—15 мин. до получения гомогенной массы. Содержимое ступки разливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 10—15 мин. (при 2500 оборотах в минуту), после чего измеряют объем центрифугата (сливая его в стеклянный цилиндр).

В стакан наливают дистиллированную воду (объем которой должен быть в шесть раз больше объема центрифугата) и, медленно помешивая в стакане деревянной палочкой, вливают в воду цептрифугат. Дезоксирибонук-леоиротеиды выпадают в виде нитей, которые наматывают на палочку.

КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА ДНК

Наличие ДНК определяют по цветным реакциям, характерным для дезоксирибозы. Часто применяют реакцию с дифениламином (CSH6—NH— С6Н5). Дифениламин с дезоксирибозой или ДНК образует соединение синего

54 цвета. Рибоза и РНК Дают с дифениламином зеленое окрашивание.

Реактивы и материалы: а) осадок дезокси-рибонуклеопротеида (см. предыдущую работу); б) дифе-ниламиновый реактив: 1 г дифениламина растворяют в 100 мл ледяной уксусной кислоты. К раствору добавляют 2,75 г концентрированной серной кислоты (р»= 1,838); в) едкий натр, 0,4%~ный раствор.

Часть осадка деяоксирибонуклеоиротенда переносят в пробирку и добавляют 0,5—1 мл раствора едкого натра (до растворения). К раствору приливают равный объем дифениламинового реактива. Осадок, выпадающий вначале, растворится в последующих порциях реактива, после чего его нагревают в течение 15—20 мин. в кипящей водяной бане. Появляется синее окрашивание.

ВЫДЕЛЕНИЕ НУКЛЕОПРОТЕИДОВ ИЗ ДРОЖЖЕЙ

Реактивы и материалы: а) дрожжи пекарские, прессованные; б) диэтиловый эфир; в) едкий натр, 0,4%-ный раствор; г) уксусная кислота, 5%-яый раствор; д) стеклянный порошок или речной песок, тщательно промытый и прокаленный.

8 г дрожжей увлажняют в Ступке 1 мл диэтилового эфира и 1 мл воды, добавляют немного стеклянного порошка или песка и растирают с 0,4%-иым раствором едкого натра, приливая его небольшими порциями (по 5—10 мл). Всего расходуют до 50 мл раствора щелочи; растирание продолжают в течение 15—20 мин. Содержимое ступки фильтруют через складчатый фильтр или центрифугируют в течение 10 мин. (при 2500 оборотах в минуту). Фильтрат или центрифугат переливают в стакан и к нему по каплям добавляют 5%-ный раствор уксусной кислоты до полного осаждения нуклеопротеида (обычно расходуют 10—15 мл раствора).

Осадок отделяют центрифугированием.

ГИДРОЛИЗ НУКЛЕОПРОТЕИДОВ

Гидролиз нуклеопротеидов происходит при кипячении с разбавленной серной кислотой. Этот процесс можно представить следующей схемой:

55

Фосфорная

мотнущатЛы^

ну/шжеы Фоаро

пирмноШшш центах

пиршшдитАм основания

Реактивы и материалы: а) осадок нуклсо-протеидов (см, предыдущую работу); б) серная кислота, 5%-ный раствор; в) серная кислота, концентрированная; г) едкий натр, 10%-ный раствор; д) аммиак, концентрированный раствор (20—25%-ный); е) сернокислая медь, 1%-ный раствор; ж) тимол, 1%-ный спиртовой раствор; з) аммиачный раствор окиси серебра: к 1—2%-ному раствору азотнокислого серебра добавляют концентрированный раствор аммиака до растворения образующегося вначале осадка; и) молибденовый реактив: 3,75 г молиб-денопокислого аммония растворяют в 50 мл воды и добавляют 50 мл 32%-ной азотной кислоты (рМ"= 1,200). Полное растворение соли происходит только после прибавления азотной кислоты.

Осадок нуклеопротеидов переносят в крутлодониую колбу, смывая его 5%-ной серной кислотой. Остаток кислоты вливают в колбу с осадком.. Всего расходуют не более 20—25 мл раствора. Колбу закрывают пробкой с обратным холодильником, ставят на асбестовую сетку, нагревают на малом огне до кипения и кипятят 1—1,5 ч, после чего охлаждают и гидролизат фильтруют через бумажный фильтр. С фильтратом проделывают реакции на полипептиды, пуриновые основания, пентозы и фосфорную кислоту.

Примечание. Гидролитическое расщепление нуклеопротеидов можно производить и без выделении их из дрожжей.

Отвешивают 1 г прессованных дрожжей, переносят навеску в круглодонную колбу, вливают 30 40 мл

56

5%-ноге раствора серной кислоты, закрывают колбу пробкой с воздушным холодильником, нагревают на малом огне до кипения, подложив под колбу асбестовую сетку. Кипятят 1—1,5

страница 18
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
дешевое хранение вещей
atlant хм 3101-000
я шоу киркорова
размер детских шкафчиков в саду

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)