химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

>для электрофореза (см. рис. 6); н) микропипетка с делениями на 0,005 мл; о) плоская кювета (из фаянса или пластмассы); и) препаровальная игла; р) стеклянные трубки длиной 75 мм и диаметром 5 мм, имеющие «воротнички» на одном из концов (см. рис. 6); с) резиновые пробки от пенициллиновых склянок.

Подготовка трубок. Четыре стеклянные трубки закрепляют «воротничками» в пробках от пеницилли-новых склянок. На расстоянии 18 мм от верхнего конца трубок карандашом «стеклограф» наносят риски. Трубки ставят в штатив. С помощью капиллярной пипетки наливают раствор сахарозы на 2 мм выше верхнего края пробок, не касаясь пробки кончиком пипетки.

Приготовление геля. 2 мл раствора акриламида и метилен-бие-акрнламида смешивают с 1 мл раствора тетраметилэтилендиамина, 4 мл раствора надсер-нокислого аммония и 1 мл трис-глицинового буфера. Полученной смесью (с помощью капиллярной пипетки) осторожно наполняют трубки до рисок, нанесенных ранее. Кончик пипетки при этом упирают в стенку трубки над самой поверхностью раствора сахарозы. Поверх слоя смеси вносят (пипеткой с ниткой) слой воды в 0,5—1 см, касаясь ниткой стенки трубки у самой поверхности смеси. При этом следят, чтобы сохранялась четкая граница между водой и нолимеризующейся смесью. По мере полимеризации эта граница смазывается, и лишь через 1 ч пос41 ле завершения процесса она снова становится четко различимой.

Чтобы поверхность геля была идеально гладкой, трубки во время полимеризации нельзя сдвигать с места. После окончания реакции воду осторожно отсасывают с помощью тонкой пипетки, трубки вынимают из пробок и устанавливают в верхней части аппарата для электрофореза (см. рис. 6).

Электрофорез. Нижнюю часть аппарата наполняют буфером, рН которого равен 8,1. Верхнюю часть переворачивают дном кверху и в трубки с гелем осторожно вводят буфер так, чтобы, не было пузырьков воздуха. После этого ее снова устанавливают на нижней, следя, чтобы в нижние концы трубок не проник воздух. Затем наливают буфер в верхнюю часть прибора. Слой жидкости должен быть на 1 см выше верхнего края трубок. Пользуясь тонкой пипеткой, удаляют пузырьки воздуха из верхней части трубок. Микропипеткой вносят в каждую трубку по 15 мкл разведенной сыворотки, касаясь кончиком пипетки стенки трубки над самой поверхностью геля. Сыворотку вводят в трубку очень медленно и осторожно, следя за тем, чтобы не произошло ее смешения с буфером.

В верхнюю часть аппарата осторожно доливают еще немного буферной смеси и закрывают крышкой. Аппарат присоединяют к источнику питания (положительный электрод — в нижней части аппарата, отрицательный — в верхней) и устанавливают такое напряжение, чтобы на каждую трубку с гелем приходилось 1—2 мА. Когда буфер проникнет в гель на 1—2 мм (о чем будет свидетельствовать окрашенное кольцо), увеличивают напряжение так, чтобы сила тока составляла 4 м.А на трубку. Ток пропускают до тех пор, пока окрашенное кольцо буфера не достигнет уровня, отстоящего на 5 мм от нижнего конца геля.

Окрашивание белковых фракций. В пластмассовую или фаянсовую кювету наливают воду. Держа трубки под водой, вынимают столбики геля, осторожно продвигая препаровальную иглу между гелем и стенкой трубки, и сразу же переносят их на 30—60 мин. в пробирки с раствором амидочерного. Окрашенные столбики ополаскивают водопроводной водой, избыток красителя удаляют с помощью раствора уксусной кислоты, свежие порции которого все время подливают в пробирки. Окрашенные столбики хранят в 7%-ном растворе уксусной кислоты. Положение отдельных фракций белков устанавливают, руководствуясь данными, приведенными на с. 40.

СЛОЖНЫЕ БЕЛКИ (ПРОТЕИДЫ)

В состав макромолекул сложных белков, кроме аминокислот, входят также соединения небелкового характера (называемые простетическими группами). В зависимости от химической природы простетических групп сложные белки делят на нуклеопротеиды, хромонротеи -ды, гликопротеиды, фосфопротеиды, линопротеиды, ме-таллопротеиды и т. д.

Хромопротеиды

Общие сведения. Хромопротеиды — это сложные белки, простетическими группами которых являются окрашенные соединения. Одни из них содержат железо, другие — медь, магний, третьи металла не содержат (фла-виипротеиды, родопсин). К хромопротеидам относятся белки, играющие очень важную роль в процессах обмена веществ. Красящее вещество крови — гемоглобин, хромопротеид мышц — миоглобин, ферменты — катала-за, цитохромпероксидаза, пероксидаза являются железосодержащими белками. К протеидам, содержащим медь, относятся растительные ферменты о-дифенолоксидаза (полифенолоксидаза) к аскорбинатоксидаза, а также протеид гемоциании, который находится в крови и гемолимфе головоногих моллюсков и некоторых других беспозвоночных животных. Флавинпротеидам принадлежат важные ферментативные функции. Они катализируют реакции дегидрогенизации, т. е. отщепления водорода от молекул органических веществ, подвергающихся окислению непосредственно или же при участии других промежуточных переносчиков электронов. Велика роль родопсина (зрительного пурпура) в восприятии све

страница 14
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
бухгалтерские курсы 1с на западе москвы
установка сигнализации
Buderus Logano G234 WS 55
курсы шитья на смоленской

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)