химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

н зажимы электродов фиксируют на выпрямителе— стабилизаторе тока. Выпрямитель подключают к электросети и постепенно увеличивают напряжение. Электрофорез про-!* водят при напряжении 200—300 В и силе тока 1,5—2 мА

36

37

в течение 1,5—2 ч, после чего снижают напряжение до нуля и выключают прибор.

Полоски электрофореграмм вынимают чистыми пинцетами и с концов, погруженных в буферный раствор, удаляют избыток влаги фильтровальной бумагой. Полоски накалывают в горизонтальном положении на гвоздики рамы и помещают для фиксации в сушильный шкаф при температуре 100—105° С в течение 10—15 мин. Сухие полоски вынимают из шкафа и опрыскивают раствором иингидрина, после чего для проявления пятен снова помещают в тот же сушильный шкаф на 3—5 мин.

Кроме электрофореза на бумаге, в последнее время широкое распространение получили методы электрофоре-тического разделения веществ на полиакриламидном, ' агаровом..геле, крахмале и т. д.

Электрофорез белков в полиакриламидном геле

(по В. Бжескому и 3. Кая юга, с дополнениями)

Общие сведения. Электрофорез в полиакриламидном

геле, как и другие вида аналогичных исследований, основан на использовании неодинаковой электрофорети-ческой подвижности различных белковых фракций. Кроме того, гель играет роль молекулярного сита: вещества, имеющие размеры молекул большие, чем диаметр пор геля, проходят через гель, не проникая внутрь его частиц; соединения же, характеризующиеся размерами молекул меньшими диаметра пор геля, будут проходить гель по порам, и поэтому их движение окажется замедленным. Благодаря способности избирательно адсорбировать более мелкие молекулы молекулярное сито позволяет разделить фракции с различным молекулярным весом.

Акриламид, употребляемый для электрофореза, представляет собой смесь двух веществ — собственно акрнла-мида Н2С=СН—СО—NH2 и .Ч,Ы'-мгтнлен-бпс-акрила-мида Н2С--СН—СО- NH—СНг—NH—СО—СН = СН2. В зависимости от сочетания этих соединений получают полимеры с различной частотой и размерами пор. Размеры пор определяются количеством Ы.Ы'-метилен-бис-акри-ламида в реакционной смеси, поскольку он содержит так •называемые поперечные метиленовые мостики, от количества которых зависит в конечном счете и диаметр пор

38

геля. Полимеризация происходит при участии надсерно-кислого аммония и катализатора Н,М,г4',М'-тетраметил-этиленднамина (ТЕМЕД). В результате реакции образуется полимер, имеющий следующее примерное строение:

f f f

NH, NH "Hi

NH

Полимеризацию полиакриламндного геля чаще всего производят в стеклянных трубках под слоем воды, так как кислород воздуха замедляет этот процесс (рис. 6).

Разделение белковых фракций сыворотки крови с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Этим методом можно разделить сывороточный белок на 18— 25 фракций, которые располагаются на столбике геля в следующей последовательности:

39

альбумины (очень широкие полосы); си-глобулины (4 полосы); 2-р-глобулины;

1-р-глобулины (фракции 4 и 5 образуют широкие, интенсивно окрашенные полосы) ;

6) аг-глобулины (16 тонких полос, расположенных

близко друг к другу);

7) угглобулины (остаются на старте).

Реактивы, материалы, аппаратура: а) сыворотка крови. Свежую кровь крупного рогатого скота взбалтывают со стеклянными бусами в течение 10—12 мин., после чего сыворотку сливают и центрифугируют 15 мин. со скоростью 3000 об/мин. Осветленную сыворотку снимают с осадка пипеткой и хранят при температуре — 20е (в морозильной камере холодильника, установив регулятор термостата на «холод»). Для электрофореза смешивают 0,04 мл сыворотки с 0,1 мл 25%-ного раствора сахарозы; б) сахароза, 40%-ный раствор; в) раствор акршамида и N.N'-метилен-бис-акриламида: 3 г акр ил а-мида и 0,1 г метилен-бне-акрилам нда растворяют в 12,3 мл дистиллированной воды (соблюдать меры предосторожности - акрилаиид ядовит!); г) N, N, N', N'-тет-раметилэтилендиамин, 0,28%-ный раствор (по объему). Сохраняют в холодильнике; д) надсернокислый аммоний, 0,14%-ный раствор (весо-объемный). Перед употреблением готовят 5 мл раствора; е) трис-глициновая буферная смесь для приготовления геля: 0,29 г глицина (гликокол-ла) и 0,06 г трис-(гидр(.жсиметил)-аминометана растворяют в 9,8 мл воды. Хранят в холодильнике; ж) трис-глициновая буферная смесь рН 8,1 :2,9 г глицина, 0,6 г тр ис- (гидрокси м етил) - ам и ном ета на и 0,5 мл 1 н соляной

40

кислоты растворяют в 97,5 мл воды. рН раствора проверяют с помощью рН-метра. Перед употреблением разбавляют дистиллированной водой в 10 раз. К каждым 100 мл разведенного буфера, которые вливают в верхнюю часть аппарата, прибавляют 0,05 мл 0,5%-иого водного раствора красителя бромфенолового синего; з) амидочер-ный 10 В: 0,1%-ный раствор на 7%-ной уксусной кислоте; и) уксусная кислота, 7%-ный раствор; к) капиллярная пипетка. Ее готовят из стеклянной трубки, которую вытягивают в капилляр длиной 8 см и диаметром 2 мм; л) пипетка с соской и Рис 7. пипстка с соской и нит-ниткой, протянутой через ее кой, протянутой через ее какал. канал (рис. 7); м) аппарат

страница 13
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
аренда ноутбука
Рекомендуем фирму Ренесанс - лестница винтовая готовая купить- быстро, качественно, недорого!
стул посетителей kf 1
Рекомендуем в КНС Нева L9U13EA - оформление в онлайн-кредит в Санкт-Петербурге.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)