химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

и, тем макромолекулы белка будут обладать большим зарядом и с большей скоростью передвигаться к положительному или отрицательному полюсу. Если в растворе находятся несколько белков, которые различаются своими изоэлек-трическими точками, то скорость их перемещения в электрическом поле будет неодинаковой. Это явление положено в основу метода электрофоретнческого исследования биологических жидкостей, который находит широкое применение при анализе свойств белков и аминокислот, а также для диагностических целей.

Для практических работ используют различные варианты метода электрофореза на бумаге.

Аппарат для электрофореза на бумаге. Основу аппарата составляет ванна из толстого стекла, в которую помещены две кюветы (анодная и катодная) с электродами, приспособления для размещения и закрепления полосок хроматографической бумаги (рамка, лабиринт, пружины) и некоторые вспомогательные части (рис. 5). Применяются платиновые или угольные электроды. Кюветы разделяются перегородками на два отделения — наружное и внутреннее, чтобы предотвратить попадание продуктов электролиза (что связано с изменением рН) на полоски бумаги. В наружных отделениях кювет располагаются электроды, во внутренние погружаются кон- . цы полосок бумага, на которые наносится исследуемая

?2' 35

жидкость. Внутреннее и наружное отделении каждой кюветы соединяются посредством кусочков фильтровальной бумаги, которые кладутся на перегородки. Кюветы заполняются буферным раствором (боратным, фосфатным, вероналовым) с определенным значением рН и ионной силы. Одинаковый уровень жидкости в кюветах поддерживают с помощью сифона.

Рис. 5. Камера аппарата для электрофореза па бумаге (по В. И. Добрыниной и К. Я. Свешниковой): I — ванна из толстого стекла; 2 — стеклянная крышки, пришлифованная к вапнет. 3 — мектрсдаше кюветы (свободно вынимаются); 4 — продольная перегородка, разделяющая кювету пополам; ? - yrtwwiwr эжктроды; S—бумажные полосы, концы их спускаются во внутреннее отделение кюветы; 7 — съемные пластинки, на которых укрепляются электроды (присоединяются К вание при помощи двух пружинок); S — рамка, на которой укрепляются и натягиваются бумажные полосы; 9 — лабиринт для укрепления бумажных полос; 10 — пружины ддя иатятияання бумажных полос; // .— подставка ддя ванны; /2—уровень на подставке; /3 — установочные винты.

Для предотвращения испарения жидкости камеру (ванну) закрывают пришлифованной стеклянной крышкой.

В комплект аппарата входит также стабилизатор и выпрямитель.

В Советском Союзе аппараты для электрофореза на бумаге выпускает фрунзенский завод «Физприбор».

Разделение глютамина и глютаминовой кислоты с помощью электрофореза на бумаге (по прописи В. И. Добрыниной и Е. Я. Свешниковой). Если на полоску фильтровальной бумаги нанести раствор смеси глютамина и глютаминовой кислоты, то после электрофореза ори рН 8,0 в течение 1,5—2 ч и последующей окраски элсктро-фореграммы можно наблюдать, что глютамин остается на месте нанесения кайли раствора, а глютамивовая кислота передвнгастя к аноду на 3—4 см. Это обусловлено

i тем, что молекулы глютамина при рН 8,0 электронейтральны и не передвигаются в электрическом поле, а молекулы глютаминовой кислоты при указанном рН имеют преобладающую диссоциацию карбоксильных групп, несут отрицательные заряды и поэтому передвигаются к аноду.

Реактивы: а) раствор глютаминовой кислоты: в 10 мл воды растворяют 50 мг глютаминовой кислоты; б) раствор глютамина: в 10 мл воды растворяют 50 мг глютамина; в) фосфатная буферная система. Готовят два раствора: 1—8,9 г Na2HPO* в 1 л, И—6,8 г КН2Р04 в 1 л. | Для получения фосфатного буфера рН 8,0 смешивают 945 мл I раствора с 55 мл II раствора; г) нингидрин, 0,2%-ный раствор в этиловом или бутиловом спирте.

В обе кюветы аппарата наливают фосфатный буфер (рН 8,0, ионная сила 0,05). На перегородки между наружным и внутренним отделениями кюветы кладут по [ кусочку фильтровальной бумаги для установления элект-| рической связи. Одинаковый уровень жидкости в обеих I кюветах устанавливают при помощи резинового или стек-1 лянного сифона, наполненного тем же буферным рanil вором. Полоску фильтровальной бумаги (лучше брать

ватман Ш 2 или хроматографическую ленинградскую) размером 1,5 2X25 см берут двумя пинцетами (во избежание загрязнения), помещают на лист бумаги и в центре проводят карандашом поперечную линию, вдоль которой штриховыми движениями наносят из микропипетки 0,02 мл смеси растворов глютамина и глютаминовой кислоты. Каждую новую порцию наносят после того, как подсохнет предыдущая. На другую полоску наносят 0,02 мл раствора глютаминовой кислоты, на третью — столько же раствора глютамина. Полоски поочередно ', смачивают буферным раствором (в чашечке). Избыток ' влаги удаляют, раскладывая полоски на листе фильтро-I вальноЙ бумаги. Полоски переносят в прибор и концы их I погружают в кюветы, В камеру можно уложить 6 ио-I. лосок. Они должны лежать горизонтально и не провисать.

Камеру ддя электрофореза закрывают крышкой,

страница 12
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
холодильник liebherr t 1714
силуэты из оргстекла
купить детский ватный матрас 60х170 недорого в москве
вентиляционная установка dvs ris 700ve рекператор материал

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.08.2017)