химический каталог




Практикум по биологической химии

Автор Д.К.Шапиро

ования их в растворах, обесеоливания биологических субстратов, определения молекулярного веса и т. д. Он основан на способности низкомолекулярных веществ проникать внутрь частиц наполнителя. В то же время большие частицы высокомолекулярных соединений проходят мимо частиц геля, вследствие чего скорость прохождения веществ через колонку с наполнителем будет различной: высокомолекулярные соединения фильтруются быстрее, а низкомолекулярные задерживаются на колонке.

32

При гельфильтрацин широко применяются сефадек-сы. Сефадексы — высокополимерные поперечносшитые полисахариды (декстраиы), обладающие сильно гидрофильными свойствами. Они устойчивы к действию органических растворителей, растворов щелочей и разбавленных кислот, разрушаются сильными кислотами (например, 0,1 и раствором соляной кислоты) и сильными окислителями.

Сефадексы различаются размерами частиц, а также количеством поперечных связей («сшивок»), что в свою очередь определяет степень набухания высокополимера. Различные марки сефадекса отличаются способностью к набуханию, на которую указывает номер геля. Номер определяет десятикратное количество воды, которое может удержать 1 г сухого сефадекса. Так, например, 1 г сефадекса (115 способен поглотить 1,5 мл воды, сефадекса G-25—2,6 мл.

Для расчета количества сефадекса, необходимого для заполнения колонки, надо знать его удельный объем, который будет занимать 1 г сухого полисахарида после набухания. Для сефадекса G-25 эта величина составляет 4—6 см3/г (в среднем 5). Объем колонки следует разделить на удельный объем сефадекса. Подученная величина укажет требующееся количество граммов сухого сефадекса.

Рекомендуемые размеры колонки 1,8X20 см, объем — 50,8 см3. Чтобы ее заполнить, потребуется 50,8 : 5=10,16 г сефадекса.

Подготовка сефадекса и заполнение колонки. Сухой

сефадекс суспендируется в большом объеме дистиллированной воды. После осаждения основной массы сефадекса надосадочную жидкость с мельчайшими частицами геля декантируют. Эту- операцию отмывки повторяют несколько раз, пока надосадочная жидкость не будет содержать мельчайших частиц. Для отмывки и набухания сефадекса требуете» 3 часа.

Колонка представляет собой цилиндрический стеклянный сосуд высотой 20—25 см и диаметром 1,8 см, с краном внизу. В качестве колонки можно использовать широкую бюретку со стеклянным краном. Ее укрепляют строго вертикально в штативе. На дно колонки кладут кусочек стеклянной ваты, на него кружок фильтровальной бумаги, вырезанный по диаметру колонки, и за?2 Д. К. Шапиро зз

тем на 1/3 объема колонки наливают фосфатный буфер (рН 6,8). Открывают кран и заполняют узкую нижнюю часть колонки буфером, далее через воронку, по палочке наливают небольшими порциями суспензию сефадекса и заполняют колонку гелем приблизительно на 70% высоты. Показателем правильного заполнения колонки является строго горизонтальная поверхность геля в ней. После заполнения колонки ее уравновешивают фосфатным буфером (рН 6,8) так, чтобы рН раствора на входе и выходе из колонки был одинаковым.

Гельфильтрации. Для гельфильтрации берут смесь гемоглобина крови с раствором рибофлавина (витамин В,).

Реактивы: а) рибофлавин, 0,02%-ный раствор на дистиллированной воде; б) раствор гемоглобина. Берут кровь из ушной вены кролика. Дистиллированной водой ее разводят в отношении 1:9; в) фосфатный буфер (рН 6,8).

Смешивают по 2 мл обоих растворов, полученную

смесь вводят в колонку, не нарушая поверхности сефадекса. После того как основная масса смеси заполнит колонку, сверху над колонкой укрепляют стеклянную воронку в пробке, подобранной по диаметру колонки, и через гель пропускают фосфатный буфер для злюцни со скоростью вытекания жидкости через колонку 0,5 мл/мин. Фракции элгоата собирают по 5 мл в мерные пробирки с помощью коллектора или вручную.

Вначале будут вцходить фракции, содержащие гемоглобин (3—6 фракций), затем окраска последующих фракций изменится на желтую в связи с элюцией рибофлавина.

После разделения с помощью гельфильтрации смеси высокомолекулярного вещества гемоглобина и низкомолекулярного рибофлавина колонка снова уравновешивается фосфатным буфером и может быть использована для дальнейшей работы.

Электрофорез белков и аминокислот на бумаге

Общие сведения. Электрофорезом называют движение заряженных коллоидных частиц в постоянном электрическом поле к противоположно заряженному электро34 ду. Явление электрофореза было открыто профессором Московского университета Ф. Ф. Рейссом в 1807 г.

В молекулах белковых веществ возникновение электрических зарядов зависит от группировок, обладающих кислотными и основными свойствами. Кислотные свойства обусловлены карбоксильными и сульфгидрильными группами, а также фенол ьиыми гидрокснламн. Основные свойства характерны для амино-, имино- и гуаииднновых групп.

Как известно, белки и аминокислоты являются биполярными ионами.

—-^ms* чтя*-— сопроцесс диссоциации белков во многом зависит от их изоэлектрической точки. Чем дальше будет отстоять значение рН среды от изоэлектрической точк

страница 11
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86

Скачать книгу "Практикум по биологической химии" (2.2Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Перейдите по ссылке, получайте скидки в КНС по промокоду "Галактика" - магазины компьютерных комплектующих с доставкой по Москве и по 100 городам России.
спортивная одежда в набережных челнах купить
купить нерж сковорода в спб
валерой и бош

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.03.2017)