химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ПЛАСТИНКАХ «СИЛУФОЛ»

Метод характеризуется более высокой чувствительностью по сравнению с хроматографией на бумаге и может быть использован

7 Зак 416

193

шлже для микроопределения дипепткдов после их модификации с помощью флуоресцентной метки — 7-хлор-4-нитро-2-окси-1,3-диазо~ лия (НБД-хлорида). НБД-хлорид ковалентно связывается с аминогруппами аминокислот и пептидов и образует производное желтого цвета. Реакция протекает по следующей схеме:

Cl NH—R

Реактивы:

1. Пластинки «Силуфол».

2. Изопропанол.

3. NH4OH — концентрированный.

4. НБД-хлорид — 0,8%-ный раствор в спирте,

5. CH3COONa — насыщенный раствор в этиловом спирте.

5—10 мкл безбелкового экстракта ткани (с. 191) наносят на пластинку «Силуфол» на расстоянии 1,5—2 см от краев и 1,5 см между пятнами. Наносят также стандартные растворы дипептидов (5—10 нмоль). Проводят восходящую хроматографию в системе: изопропанол—аммиак—вода (7:2:1). Камеру предварительно насыщают парами растворителя. Пластинки высушивают под тягой. Пятна дипептидов выявляют, опрыскивая пластинку раствором нингидрина (с. 135). Затем пластинки высушивают в струе теплого воздуха и выдерживают при 70° С в течение 10 мин. Пятна аминокислот проявляются при комнатной температуре, пятна дипептидов — при нагревании. Окраску сканируют.

Получение НБД-производных дипептидов. К 0,25 мл спиртового экстракта ткани (с. 192) добавляют 0,05 мл смеси НБД-хлорида и насыщенного раствора CH3COONa в соотношении 4:1. Пробу инкубируют 20 мин при 75° С, охлаждают и наносят аликвоты (4—10 мкл) на пластинку «Силуфол». Хроматографию проводят в системе изопропанол — вода (7 : 2). Сканируют при 470 нм.

ЛИТЕРАТУРА

1. Мешкова Н. П. Дипептиды скелетной мускулатуры — карнозин и анзернн// //Усп. биол. хим. 1964. Т. 6. С. 86.

2. Ткач у к В. А., Малиновская К. М. Быстрый и высокочувствительный метод количественного определения карнозина и анзерина в тканях животных//Вопр. мед. хим. 1977. Т. 23. № 1. С. 127.

3. G г u s h К. G. Carnosine and related substances in animal tissues//Comp, Biochem. and Physiol. 1970. Vol. 34. P. 3.

V. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СВОБОДНЫХ АМИНОКИСЛОТ

Разделение свободных аминокислот в безбелковых экстрактах тканей проводят методами ионообменной хроматографии на колонках (в автоматическом анализаторе аминокислот) и хроматографии на бу

адаге в различных растворителях. Для количественного определения ?аминокислот применяют те же методы, что и при анализе аминокислотного состава белков (с. 131, 133).

1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СВОБОДНЫХ АМИНОКИСЛОТ В МЫШЕЧНОЙ

ТКАНИ

Реактивы: см. на с. 127.

Экстракт мышечной ткани может быть получен одним из способов, -описанных выше (с. 191). После упаривания на роторном испарителе сухой остаток растворяют в смеси НСООН—СНзСООН—Н20 (7:5: 13) с таким расчетом, чтобы 1 мл раствора соответствовал 1,5—2 г ткани. Раствор наносят на хроматограмму в количестве, эквивалентном 30—50 мг ткани. На ту же хроматограмму рядом с исследуемыми растворами наносят растворы аминокислот-«свидетелей». Постановку хроматограмм и их обработку см. на с. 126. После обработки нингидрином проводят определение содержания различных аминокислот в экстракте и рассчитывают его в микромолях, миллиграмм-лроцентах на влажный вес ткани или в процентах к небелковому или общему азоту.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СВОБОДНЫХ АМИНОКИСЛОТ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Реактивы:

1.' СНзСООН — 0,04 н. раствор. 2. Реактивы см. на с. 127.

К 1—2 мл крови добавляют равный объем 0,04 н. раствора СНзСООН, нагревают на кипящей водяной бане 2—3 мин, охлаждают я осадок белка отделяют центрифугированием. Центрифугат сливают и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 0,1—0,2 мл смеси НСООН—СНзСООН—Н20 (7:5: 13), нерастворившийся осадок отбрасывают. На хроматограмму наносят 0,01—0,02 мл полученного раствора и стандартные смеси аминокислот и хроматографируют в бута-нолуксусной смеси. После разгонки хроматограммы обрабатывают нингидрином, идентифицируют аминокислоты и проводят их количественное определение. Содержание аминокислот в сыворотке крови выражают в микромолях, миллиграмм-процентах или процентах к небелковому азоту.

ЛИТЕРАТУРА

1. Майстер А. Биохимия аминокислот. М., 1961.

2. П а с х и н а Т. С. Количественное определение аминокислот при помощи хроматографии на бумаге//Современные методы в биохимии. М., 1964. С. 162.3. Литература к разделу «Определение аминокислотного состава белков и пептидов».

Раздел третий ЭНЗИМОЛОГИЯ

Раздел «Энзимология» рассчитан на студентов, уже познакомив-' шихся с некоторыми современными методами химии белка: определением концентрации белка, хроматографией, электрофорезом и др. Основная цель его состоит в том, чтобы дать возможность студентам приобрести навыки экспериментальной работы, необходимые для начинающего энзимолога. В ходе практикума студенты осваивают методы выделения и очистки какого-либо фермента, а также изучают свойства полученного препарата. В связи с этим приводятся общие указания по работе с ферментами, способам их очистки, правилам

страница 99
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
декоративная штукатурка дома
bausch lomb biotrue
http://www.prokatmedia.ru/
концерт на красной пресне адрес

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(27.07.2017)