химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

формным слоями, водный слой отсасывают шприцем, а в колбу приливают воду (до прежнего уровня), встряхивают и оставляют для расслаивания. Водный слой отсасывают и присоединяют к первому. Эту операцию повторяют еще 2 раза. Объединенный водный раствор упаривают на роторном испарителе.

1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАРНОЗИНА В БЕЗБЕЛКОВОМ ЭКСТРАКТЕ ПО ДИАЗОРЕАКЦИИ

Реактивы:

1. Сульфаниловая кислота — раствор содержит 0,9 г сульфанило-вой кислоты, 9 мл концентрированной НС1, воды до 100 мл.

2. NaN02 — 5%-ный раствор, свежеприготовленный.

3. Диазотированная сульфаниловая кислота, В колбу, стоящую во льду, помещают 6 мл раствора сульфаниловой кислоты, приливают туда 6 мл свежеприготовленного раствора NaN02, перемешивают и оставляют на 5 мин. Прибавляют при помешивании еще 24 мл NaN02 и через 5 мин доливают водой до 100 мл. Каждый раз готовят свежий раствор (на льду хранится в течение 5—б ч).

4. Ыа2СОз безводный — 10%-ный раствор.

5. Карнозин — стандартный раствор 0,5 мг/мл.

Безбелковый экстракт после упаривания на роторном испарителе растворяют в 1—2 мл воды. Отбирают различные количества этого раствора, доводят водой до 2 мл, приливают 3 мл диазореактива, хорошо перемешивают и оставляют на 5 мин. Затем добавляют 3 мл 10%-ного раствора соды, перемешивают и через 10 мин колориметри-руют при 490 нм. Следует убедиться в том, что интенсивность образующейся окраски пропорциональна количеству исследуемого раствора, взятого для определения.

Количество карнозина рассчитывают с помощью калибровочного графика, построенного по стандартному раствору карнозина, содержащему от 0,05 до 0,5 мкмоль в пробе. Рассчитывают количество карнозина в микромолях на 1 г ткани.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДИПЕПТИДОВ С ПОМОЩЬЮ ХРОМАТОГРАФИИ НА БУМАГЕ

Дипептиды и составляющие их аминокислоты хорошо разделяются методом бумажной хроматографии (с. 126) в водонасыщенном феноле или системе «-бутанол—пропанол—20%-ный аммиак в соотношении 2:2:1. Хроматограмму обрабатывают раствором нингидрина или диа-зотированной сульфаниловой кислотой (для выявления карнозина и гистидина).

Реактивы:

1. Фенол — перегнанный, водонасыщенный (с. 168).

2. НС1 — концентрированная.

3. Ацетон.

4. Нингидрин — 0,5%-ный раствор в ацетоне (с. 127).

5. Хроматографическая бумага (с. 127).

6. Стандартные растворы карнозина и анзерина — 0,01 М растворы.

7. Смесь для элюции — 0,1 н. раствор ЫаНСОз смешивают с этиловым спиртом в соотношении 1:1.

8. Диазотированная сульфаниловая кислота. Приготовление см. на с. 192, но раствор должен быть в 2 раза более концентрированным, т е. его доводят водой до 50 мл.

9. Na2C03 — 20%- и 1%-ный растворы.

Подготовка хроматографической камеры. На дно камеры (см. рис. 17) помещают кристаллизатор или чашку Петри с водонасыщен-ным раствором фенола. Туда же ставят стаканчик со смесью концентрированной НС1 и воды в соотношении 3:1, камеру закрывают и оставляют для насыщения парами растворителя.

Проведение хроматографического разделения. На листе хроматографической бумаги нужного размера на расстоянии 4 см от нижнего края проводят стартовую линию, на которую наносят исследуемый раствор, содержащий дипептиды. Безбелковый экстракт ткани после упаривания на роторном испарителе чаще всего растворяют в смеси НСООН—СН3СООН—Н20 (7:5:13) или в 10%-ном изопропаноле, чтобы 1 мл раствора соответствовал 1,5—2 г ткани и наносят на хроматограмму небольшими порциями (0,01—0,03 мл), подсушивая бумагу теплым воздухом. На эту же хроматограмму наносят стандартные растворы карнозина и анзерина, содержащие по 0,03—0,05 мкмоль в пятне. Бумагу сшивают в виде цилиндра (следят, чтобы края не соприкасались) и помещают в хроматографическую камеру в строго вертикальном положении. Когда фронт растворителя дойдет до верхнего края бумаги, хроматограмму вынимают и высушивают под тягой в течение 2—3 сут. От следов фенола хроматограмму отмывают горячим ацетоном. Для этого сухую хроматограмму сворачивают трубочкой, перевязывают ниткой, помещают в цилиндр, заливают кипящим ацетоном и оставляют на 10—15 мин; промывание повторяют 2—3 раза. Высушивают под тягой.

Проявление хроматограммы. Раствор нингидрина наливают в ванночку и равномерно пропитывают им хроматограмму. Затем ее высушивают под тягой и помещают в термостат при 110° С на 5—10 мин. При этом пятна карнозина и анзерина приобретают серо-голубую окраску. Элюцию проводят реактивом № 7 в темноте в течение 2—3 ч и затем колориметрируют при 582 нм.

При проявлении на хроматограмме карнозина и гистидина диазо-реактивом ее опрыскивают из пульверизатора диазотированной сульфаниловой кислотой, затем слегка влажную хроматограмму опрыскивают 20%-ным раствором Na2C03. Пятна карнозина приобретают интенсивно оранжевую окраску. Окрашенные участки хроматограммы вырезают и элюируют 1%-ным раствором соды. Колориметрируют при 500 нм. Пользуясь стандартным раствором карнозина, строят калибровочный график и рассчитывают содержание дипептида в микромолях на грамм ткани.

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДИПЕПТИДОВ С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ НА

страница 98
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Жилой комплекс МФК Город Столиц купить
журнальный стол в небольшую комнату
Skagen Holst SKW2388
чайник zwilling купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.02.2017)