химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

.

5. Креатин — стандартный раствор, содержащий 0,5 мкмоль/мл.

Мышечную ткань осторожно срезают по сухожилиям, избегая перерезки мышечных волокон, так как это приводит к сокращению мышечных клеток и увеличению свободного креатина. Изолированную мышцу тотчас же помещают в жидкий азот, измельчают в ступке и, делают навески на 200—300 мг. Навески помещают в предварительно охлажденный раствор НСЮ4, объем доводят до 10 мл, тщательно перемешивают и осадок белка сразу же удаляют фильтрованием или центрифугированием на холоде. Отбирают 7—8 мл безбелкового раствора и нейтрализуют его рассчитанным количеством 2 н. КОН. Раствор охлаждают, выпавший в осадок КСЮ4 удаляют фильтрованием и в фильтрате определяют креатин. Для этого к 1 мл фильтрата добавляют 1 мл щелочного раствора а-нафтола и 0,5 мл раствора диацетила. Объем проб доводят водой до 5 мл, тщательно перемешивают и оставляют при комнатной температуре в темноте на 30 мин. Окраску колориметрируют при 540 нм. Одновременно с опытными ставят пробы, содержащие 0,1—0,5 мкмоль стандартного раствора креатина Строят калибровочный график, определяют содержание креатина в опытных пробах и в исследуемой ткани, учитывая произведенные разведения.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФОСФОКРЕАТИНА ПО ФОСФОРУ

Креатинфосфат, характеризующийся высокой лабильностью в кислой среде, можно определить по содержанию фосфора методом Фиске—Суббароу в безбелковом экстракте, из которого предварительно удален неорганический фосфат.

Реактивы:

1. Магнезиальная смесь (с. 38).

2. Реактивы для определения фосфата (с. 34).

К 1 мл безбелкового раствора (полученного, как при определении креатина) приливают 1,5 мл магнезиальной смеси, добавляют 1 каплю фенолфталеина и проводят осаждение неорганического фосфата (с. 38). Осадок неорганического фосфата удаляют фильтрованием.

Отбирают 1,5 мл фильтрата и проводят в нем определение фосфора (с. 33). Рассчитывают количество креатинфосфата во взятой пробе.

ЛИТЕРАТУРА

Е g g 1 е t о п Р et al. The estimation of creatine and of diacetyV/Biochem J. 1943. Vol. 37. P. 526.

1 ПЛ

IV. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГИСТИДИНСОДЕРЖАЩИХ ДИПЕПТИДОВ

Гистидинсодержащие дипептиды — карнозин (р-аланилгистидин) и анзерин (р-аланил-1-метилгистидин) являются характерной составной частью скелетной мускулатуры позвоночных животных. Содержание дипептидов может достигать 1 % на влажный вес ткани. При этом у некоторых видов животных преобладает карнозин, у других анзерин; из мышц змей выделен изомер анзерина р-аланил-3-метилгистидин (офидин, баленин). В сердечной мышце и ткани мозга дипептидов мало. В небольшом количестве карнозин обнаружен также в обонятельных луковицах млекопитающих. Из мозговой ткани выделен гомолог карнозина у-аминобутирилгистидин.

Гистидинсодержащие дипептиды определяют в безбелковом экстракте мышц после разделения их методами хроматографии на бумаге, в тонком слое силикагеля или ионообменной хроматографии на колонке (в автоматическом анализаторе аминокислот). Как и все первичные амины, дипептиды можно обнаружить по реакции с нингидрином, флуорескамином и с о-фталевым диальдегидом. Карнозин, кроме того, может быть определен по цветной реакции Паули с диазотиро-ванной сульфаниловой кислотой.

Препаративное выделение дипептидов из безбелкового экстракта осуществляется в виде ртутных солей или хроматографией на колонках с ионообменными смолами.

Получение безбелкового экстракта мышечной ткани

Белки в экстракте мышечной ткани осаждают хлорной кислотой или спиртом. Во втором случае безбелковый мышечный экстракт не содержит солей.

Реактивы:

1. HCIO4 — 0,5 н. раствор.

2. КОН — 5 н. раствор.

3 Этиловый спирт —96%- и 80%-ный. 4. Хлороформ.

Осаждение хлорной кислотой. Навеску мышечной ткани (3—5 г) освобождают от жира, соединительной ткани и измельчают ножницами на холоде. К кашице добавляют 5 объемов охлажденного 0,5 н. раствора НСЮ4, гомогенизируют или тщательно растирают в ступке. Суспензию центрифугируют (20 мин, 1000 g), надосадочную жидкость собирают, осадок вновь суспендируют в 1—1,5 объемах хлорной кислоты. Промывные воды соединяют с центрифугатом. Хлорную кислоту удаляют в виде перхлората калия (с. 29). Полученный центрифугат упаривают на роторном испарителе при температуре 40—45° С.

Осаждение белков спиртом. Навеску (2—3 г) измельченной ножницами на холоде ткани переносят в гомогенизатор с 5 объемами охлажденного 96%-ного этанола; гомогенат сливают в центрифужный стакан, оставляют при комнатной температуре на 20 мин, затем центрифугируют 10 мин при 3000 g. Надосадочную жидкость сливают в колбу с узким горлом (при обработке 2—3 г мышц объем колбы 200 мл, при получении экстракта из большой навески можно пользоваться делительной воронкой), осадок трижды промывают 15 мл

1Q1

80%-ного этанола, сливая центрифугат в колбу. К спиртовому экстракту приливают хлороформ (так, чтобы верхняя граница жидкости оказалась в узкой части Колбы), встряхивают в течение 15 мин и оставляют для отстаивания. Когда четко обозначится граница между водным и спирто-хлоро

страница 97
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
наружная реклама для кафе фото
отопление дизельным котлом
прокат аудио аппаратуры в москве
где лучше отучиться на мастера маникюра в москве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)