химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

кювету спектрофотометра помещают 1,0 мл нейтрализованного экстракта ткани, 1,0 мл 0,05 М фосфатного буфера, 0,3 мл 0,1 М раствора семикарбазида, 0,1 мл этилового спирта и воду до 2,95 мл. Снимают исходные показатели оптической плотности опытной пробы против контрольной (не содержащей экстракта). Реакцию начинают добавлением 0,05 мл алкогольдегидрогеназы. Регистрацию нарастания оптической плотности прекращают, когда два последних отсчета, сделанные с интервалом в 5 мин, совпадают.

Определение НАДФ+. Метод основан на специфическом восстановлении НАДФ+ в присутствии глюкозо-б-фосфатдегидрогеназы (с. 40). Количество НАДФ+ определяют по изменению оптической плотности при 340 нм.

В спектрофотометрическую кювету помещают 1,0 мл нейтрализованного экстракта ткани, 0,5 мл 0,1 М глицил-глицинового буфера, 0,1 мл 0,033 М раствора MgCl2, 0,1 мл 0,025 М раствора глюкозо-б-фосфата и Н2О до 2,95 мл. Реакцию начинают добавлением 0,05 мл глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и регистрируют нарастание оптической плотности до полного прекращения ее изменений.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАДН И НАДФН

31 Щелочную экстракцию ткани удобно проводить в коротких широких пробирках, заканчивающихся воронкообразным расширением. Это помогает исключить потери, возможные при внесении навески ткани в нагретый раствор соды.

Восстановленные никотинамидные коферменты экстрагируют из ткани 4-кратным объемом 0,1 М раствора Na2C03. Для предотвращения окисления восстановленных нуклеотидов к раствору соды непосредственно перед помещением пробирок в водяную баню добавляют раствор цистеина (ОД мл на 3,9 мл раствора соды). Пробирки31 нагревают в кипящей водяной бане в течение 3 мин, после чего в них

быстро помещают 1 г замороженной и измельченной в порошок ткани, хорошо перемешивают стеклянной палочкой и продолжают нагревание еще 2 мин. Затем пробы охлаждают во льду и полученный экстракт нейтрализуют 1 М раствором яблочной кислоты до рН 7,0. Осадок ткани отделяют центрифугированием при 10 000 g в течение 10 мин и промывают нейтрализованным до рН 7,0 раствором 0,05 М Ыа2СОз. Промывные воды объединяют с первым центрифугатом, измеряют объем и оставляют на сутки при + 4°С. Установлено, что за 24 ч в щелочных экстрактах происходит спонтанное окисление восстановленных нуклеотидов. Критерием полноты окисления НАДН и НАДФН служит отсутствие изменения оптической плотности при 340 нм после добавления в кювету с 2,4 мл глицилглицинового буфера 0,5 мл щелочного экстракта и 0,1 мл феназинметасульфата.

НАДН и НАДФН в щелочных экстрактах после спонтанного окисления до НАД+ и НАДФ+ определяют описанными выше методами. При низком содержании восстановленных никотинамидных коферментов в ткани можно воспользоваться для их определения более чувствительным методом Слейтера (см. ссылку 2).

ЛИТЕРАТУРА

1. Современные методы в биохимий/Под ред. В. Н. Ореховича. М., 1964.

2. Практикум по биохимии/Под ред. Н. П. Мешковой и С. Е. Северина. М., 1979.

3. Методы исследования нуклеиновых кнслот/Под ред. А. Н. Белозерского. М., 1970.

4. Цейтлин Л. А. Никотинамидные коферменты//Усп. биол. хим. 1967. Т. 8. С. 249.

5. Па со с Ф., Телепнева В. И. Содержание никотинамидных коферментов в нормальной и регенерирующей печени крыс/Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1985. T XCIX, № 4 С 432

III. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КРЕАТИНА И ФОСФОКРЕАТИНА

Креатин (метилгуанидинуксусная кислота) является обязательной составной частью поперечнополосатой мускулатуры. Содержание креатина в скелетных мышцах достигает 400—500 мг%, в сердечной мышце креатина в 2—3 раза меньше. Креатин найден также в ткани мозга (около 100 мг%) и в значительно меньших количествах в паренхиматозных органах (10—50 мг%).) В мышечной ткани креатин содержится как в свободном виде, так и в виде фосфорилированного производного (креатинфосфата, фосфокреатина), который образуется в результате обратимого переноса фосфорильного остатка с АТФ на креатин. Реакция катализируется креатинкиназой (АТФ: креатин—фосфо-трансфераза, КФ 2.7.3.2).

А ФЛ. креатинкнназа _ _

креатин + АТФ ^_ —* креатинфосфат + АДФ.

Соотношение количества свободного креатина и креатинфосфата в мышечной ткани сильно варьирует: в покоящейся мышце накапливается креатинфосфат, при сокращении происходит распад АТФ, но за счет креатинкиназной реакции она регенерирует, что приводит к увеличению свободного креатина и уменьшению креатинфосфата.

1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КРЕАТИНА С ДИАЦЕТИЛОМ

Определение свободного креатина проводят в безбелковом растворе, используя цветную реакцию с диацетилом в присутствии а-наф-тола.

18f>

Реактивы:

1. НСЮ4 — 0,5 н. раствор.

2. КОН — 2 н. раствор.

3. Диацетил — 0,05%-ный раствор. 1,6 г диметилглиоксима нагревают в колбе Вюрца на песчаной бане с 200 мл 5 н. раствора H2SO4. Собирают первые 50 мл дистиллята и доводят водой до 100 мл. При этом получается 1%-ный раствор диацетила. Диацетил хранят в холодильнике; перед употреблением разводят.

4. а-нафтол — 1%-ный щелочной раствор, готовят на растворе, содержащем 6 г NaOH и 16 г Na2C03 на 100 мл Н20

страница 96
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
проектор в прокат
наклейка на спойлер форд фокус
диммер с пультом ду 220в купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(20.02.2017)