химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

илового спирта — 0,5 см) и оставляют на сутки для насыщения камеры парами растворителя.

Разделение. На листе хроматографической бумаги проводят простым карандашом линию старта (на расстоянии 4 см от нижнего края листа), на которую наносят исследуемые растворы (суммарное количество адениловых нуклеотидов — 0,3—0,4 мкмоль). На ту же хроматограмму наносят растворы нуклеотидов-«свидетелей» по 0,05— 0,1 мкмоль каждого Интервал между точками на линии старта должен быть не менее 4—5 см. Растворы наносят небольшими порциями и подсушивают в токе холодного воздуха. При восходящей хроматографии (рис 17) лист хроматографической бумаги сшивают, следя, чтобы края не соприкасались, помещают в камеру и укрепляют в вертикальном положении. После того как растворитель поднимется на 3/4 высоты бумаги, хроматограмму вынимают, высушивают и просматривают в ультрахемископе Если разделение недостаточно четкое, хро-матографирование повторяют

МЕТОД ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ Хроматография на пластинках «Силуфол»

Реактивы:

1. NH4OH — концентрированный.

2. Изопропиловыч спирт

3. Пластинки «Силуфол UV-254».

На пластинку на расстоянии 1,5—2 см от нижнего края наносят с интервалом в 1 —1,5 см исследуемый раствор и растворы нуклеотидов-«свидетелей» по 2—4 нмоль каждого нуклеотида. Растворы наносят капиллярами и подсушивают в токе холодного воздуха. Пластинку помещают в сосуд с плоским дном, куда слоем в 1 см наливают растворитель: изопропанол — вода — аммиак (7:2: 1,5) 30. Когда фронт растворителя поднимется до верхнего края пластинки, ее вынимают, высушивают под тягой и положение нуклеотидов на хроматограмме определяют с помощью ультрахемископа.

Хроматография на пластинках «Фиксион»

Реактивы:

1. НС1 — 1 н раствор

2. Пластинки «Фиксион 50x8».

Перед разделением пластинки «Фиксион» переводят в Н+-форму. Для этого их промывают в течение 16 ч 1 н. раствором НС1, а затем бидистиллированной водой. Способ промывки описан на с. 134. На высушенные промытые пластинки на расстоянии 2 см от нижнего края наносят исследуемые растворы и нуклеотиды-«свидетели» с интервалом 1,5—2 см между точками. Наносимые образцы должны содержать не менее 0,03 мкмоль каждого нуклеотида. Затем пластинку помещают в хроматографическую камеру в раствор 1 н. НС1. Когда растворитель поднимется на 3/4 высоты пластинки, ее вынимают, высушивают и пятна нуклеотидов локализуют с помощью ультрахемископа

Хроматография на пластинках с модифицированной целлюлозой

Для разделения нуклеотидов используют слабо- и среднеосновные анионообменники на основе целлюлозы. ДЭАЭ-, Эктеола- и ПЭИ-цел-люлозу. Могут быть использованы как коммерческие пластинки, так и приготовленные в лаборатории. Подготовка сорбента и приготовление пластинок с тонким слоем ПЭИ-целлюлозы описаны на с. 182. В отличие от хроматографии рибомононуклеотидов хорошего разделения компонентов адениловой системы можно добиться, применяя в качестве растворителя 0,5 М раствор хлористого лития

Здесь дается описание метода тонкослойной хроматографии на Эктеола-целлюлозе.

Реактивы.

1. Эктеола-целлюлоза.

2 НС1 —0,01 и 0,05 н. растворы.

30 Другие рекомендуемые растворители диоксан — концентрированный NH4OH — вода (6 1 4), бутанол — СНзСООН — вода (5 2 3)

Приготовление пластинок. Эктеола-целлюлозу (5 г) растирают в агатовой ступке с 15 мл воды до кашицеобразной массы и добавляют около 15 мл воды до получения легко растекающейся суспензии. В центр чистой стеклянной пластинки (9x12 см) наносят 5 мл взвеси, быстрыми покачиваниями стекла распределяют суспензию равномерно по поверхности пластинки и помещают пластинку для подсыхания на горизонтальный столик, выверенный по уровню.

Нанесение образца и разделение нуклеотидов. На расстоянии 1,5— 2 см от края пластинки проводят стартовую линию, на которую с интервалами в 2 см наносят исследуемый раствор (0,01—0,02 мл) и стандартные растворы нуклеотидов, содержащие не менее 0,1 мкмоль каждого нуклеотида. Пластинку помещают в сосуд с плоским дном, в который налит 0,05 н раствор соляной кислоты. Через 5—10 мин, когда растворитель поднимется на 2/3 высоты пластинки, ее вычимают,. высушивают в токе теплого воздуха и идентифицируют положение нуклеотидов по поглощению в ультрафиолетовой области спектра

Для количественного определения участки, содержащие нуклеотиды, аккуратно обводят простым карандашом, соскабливают целлюлозу в пробирку, заливают 5 мл 0,01 н. раствора НС1 и оставляют на сутки. Осадок отделяют центрифугированием и в центрифугате проводят измерение поглощения при 260 и 290 нм. По разности поглощения рассчитывают содержание нуклеотидов в пробах.

МЕТОД ИОНООБМЕННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ НА КОЛОНКЕ Реактивы:

1. Анионит типа Дауэкс-1 или Даузкс-2.

2. НС1 — 0,003 н., 0,01 н. и 1 н. растворы.

3. NaCl — 0,02 М и 0,2 М растворы, приготовленные на 0,01 н, растворе НС1.

4. NH4OH — 1 н. раствор.

5. NH4CI —0,01 М раствор.

Подготовка анионита и заполнение колонки. 2 г анионита суспендируют в 50 мл воды и дают отстояться. Жидкость с осадка декантирую

страница 94
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
обучение фундаментальному анализу мфсо
холодильник вестел цена фото ремонт
De Dietrich DTG 230 14
гироскутер самый дешевый 12000

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)