химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

пластинок с ПЭИ-целлюлозой. Порошок ПЭИ-цел-люлозы (10—20 г) промывают 50%-ным этиловым спиртом и проводят обработку сорбента по методике, описанной на с. 109. Для приготовления пластинок можно использовать как чистую ПЭИ-целлюлозу„ так и смесь ее с микрокристаллической целлюлозой «Фильтрак» в весовом соотношении 1:4. Для приготовления пластинки размером ШХ Х20 см необходимо 2—4 г целлюлозы (30—35 мл суспензии).

Стеклянные пластинки тщательно моют детергентом, прополаскивают, протирают эфиром и кладут на строго горизонтальную поверхность. Целлюлозу суспендируют в 15—20 мл воды и гомогенизируют в гомогенизаторе Поттера для того, чтобы суспензия была равномерной и не содержала комков. Пипеткой с широким отверстием равномерно распределяют суспензию по пластинке и оставляют сушиться при комнатной температуре на 10—12 ч.

Хроматографическое разделение. На пластинку с ПЭИ-целлюлозой на расстоянии 1,5—2 см от нижнего края и между точками наносят гидролизат РНК и мононуклеотиды-«свидетели» в количестве 100— 150 нмоль каждого (на тонкие пластинки промышленного изготовления 15—30 нмоль). Восходящую хроматографию проводят сначала в. 1 М растворе уксусной кислоты. Когда растворитель поднимется на 4—5 см, пластинку вынимают и, не высушивая, помещают в 0,3 М раствор хлористого лития. Разделение продолжают до тех пор, пока фронт растворителя не поднимется на 4/5 высоты пластинки Хроматограмму вынимают, высушивают и просматривают в ультрахемиско-пе. В описанной системе относительная подвижность возрастает в ряду: гуаниловая, уридиловая, адениловая и цитидиловая кислоты.

ЛИТЕРАТУРА

1. Банюшин Б. Ф. Определение иуклеотидного состава нуклеиновых кислот//Со-временные методы в биохимии/Под ред. В. Н. Ореховича. М., 1964. Т. 1. С. 236. U. Методы исследования нуклеиновых кислот/Под ред. А. Н. Белозерского. М., 1970.

3. Остерман Л. А. Хроматография белков н нуклеиновых кислот. М., 1985.

4. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. М., 1981. Т. 2.

В. НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ АЗОТСОДЕРЖАЩИЕ СОЕДИНЕНИЯ

I. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АДЕНИНСОДЕРЖАЩИХ НУКЛЕОТИДОВ В ЖИВОТНЫХ ТКАНЯХ

Нуклеотиды не только являются структурными элементами нуклеиновых кислот, но и содержатся в клетках в свободном виде. Известно большое число ферментативных реакций, для которых необходимы компоненты адениловой системы в качестве субстратов, доноров энергии и регуляторов.

Адениловые нуклеотиды переходят в раствор при обработке тканей хлорной или трихлоруксусной кислотой. Белки при этом денатурируют. В безбелковом экстракте компоненты адениловой системы разделяют хроматографическими и электрофоретическими методами.

Получение безбелкового экстракта тканей

Реактивы:

1. НСЮ4 или СС13СООН — 4%-ные растворы.

Только что извлеченные из организма мышцы (сердце, печень, мозг) помещают в хорошо охлажденную ступку и заливают жидким азотом. Сильно промерзшую ткань тщательно растирают, подливая жидкий азот, и быстро делают навески по 0,3—0,4 г (с. 29). Навески помещают в пробирки, стоящие во льду, приливают двойной объем охлажденного раствора кислоты и ткань тщательно размешивают в течение 5—10 мин. Белок удаляют центрифугированием (10 мин, 3000 g); надосадочную жидкость используют для электрофоретическо-го или хроматографического анализа. Перед проведением хроматографического разделения необходимо освободиться от трихлоруксусной кислоты экстракцией эфиром, а от хлорной кислоты — осаждением КОН (с. 29, 33). При необходимости надосадочную жидкость концентрируют лиофилизацией.

Адениловые нуклеотиды из безбелкового центрифугата можно выделить также в виде ртутных солей (см. п. 2 в «Литературе», с. 189).

1. РАЗДЕЛЕНИЕ АДЕНИЛОВЫХ НУКЛЕОТИДОВ

МЕТОД ЭЛЕКТРОФОРЕЗА НА БУМАГЕ Реактивы:

1. Цитратный буфер — 0,05 М, рН 5,1.

2. Стандартные растворы АТФ, АДФ, АМФ —0,01 М растворы

3. Бумага хроматографическая— ленинградская (промытая, см. с. 178), FN 14—17, ватман 3 ММ.

Разделение проводят в камере для низковольтного электрофореза (с. 89). Кюветы заполняют цитратным буфером. Вырезают полосы хроматографической бумаги шириной 4—5 см и наносят на них тканевой экстракт и стандартные растворы нуклеотидов-«свидетелей» в количестве, соответствующем 0,1—0,15 мкмоль каждого нуклеотида Разделение проводят в течение 4—5 ч при градиенте напряжения 15— 20 В/см и силе тока 0,5 мА на 1 см поперечного сечения бумажной полосы. Местоположение нуклеотидов идентифицируют в ультрахеми-скопе.

МЕТОД ХРОМАТОГРАФИИ НА БУМАГЕ Реактивы:

1. Цитрат натрия (3-замещенный)—2,5%-ный раствор, рН 8,5

2. Спирт изоамиловый.

3. Стандартные растворы АТФ, АДФ и АМФ — 0,01 М растворы,

4. Бумага хроматографическая ленинградская (промытая, см, с. 178), FN 14—17.

Приготовление растворителя. Равные объемы изоамилового спирта и 2,5%-ного раствора цитрата натрия сливают в делительную воронку и встряхивают в течение 10 мин для взаимного насыщения. После расслоения отделяют раствор цитрата и изоамилового спирта. Оба раствора помещают в хроматографическую камеру (высота слоя цитрата — 1 см, изоам

страница 93
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
оформление тканюь купить ткань
Компания Ренессанс: монтаж деревянной лестницы цена за работу - надежно и доступно!
стул zeta
Компьютерная техника в КНС Нева - принтер Samsung купить - кредит онлайн не выходя из дома в Санкт-Петербурге!

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)