химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

одить дополнительное определение оптической плотности при 260 нм; оптическая плотность при 260 и 270 нм не должна различаться болёеГчем на ±15%.

2.ОПРЕДЕЛЕНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ПО ФОСФОРУ

Определение по фосфору считается наиболее надежным методом оценки количества нуклеиновых кислот, так как его процентное содержание в наименьшей степени зависит от иуклеотидного состава: для ДНК оно составляет 9,8—10,1%, для РНК —9,1—9,626. При определении фосфора нуклеиновых кислот в тканях необходимо предварительно удалить свободные нуклеотиды, неорганический фосфат, а также все фосфорсодержащие соединения ненуклеотидной природы, в частности липиды.

Реактивы:

1. НСЮ4 — концентрированная и 0,2 н. раствор.

2. Этиловый спирт 96%-ный.

3. Эфир.

4. Реактивы для определения общего фосфора (с. 34).

* Измельченную на холоде навеску ткани (100—200 мг) помещают в центрифужную пробирку с 10 мл охлажденного 0,2 н. раствора хлорной кислоты, тщательно перемешивают и осадок отделяют центрифугированием на холоде (3000 g, 10 мин). Центрифугат отбрасывают, осадок отмывают повторно хлорной кислотой. Затем осадок промывают 5—10 мл охлажденного спирта для удаления кислоты и два раза смесью спирта с эфиром (1:1) при комнатной температуре для удаления липидов и пигментов. В заключение осадок обрабатывают эфиром и оставляют в вакуум-эксикаторе.

Для проведения минерализации высушенный материал переносят в колбу Кьельдаля или тугоплавкую пробирку и добавляют 0,3 мл смеси хлорной и серной кислот. Дальнейшие операции см. на с. 44.

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ПО ПЕНТОЗЕ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ДНК С ДИФЕНИЛАМИНОМ ПО ДИШЕ

Метод основан на реакции между дифениламином и дезоксирибо-зой, отщепляющейся от пуриновых нуклеотидов в результате кислотного гидролиза. N-гликозидная связь в пиримидиновых нуклеотидах при этом не разрушается и вследствие этого определяется лишь около половины углевода, входящего в состав ДНК; поэтому рекомендуется в качестве стандарта использовать гидролизат ДНК, концентрацию которого предварительно определяют спектрофотометрическим методом.

Реактивы:

2э Исходя из содержания фосфата при спектрофотометрическом определении пересчетный коэффициент для ДНК составляет 10,1, для РНК — 10,5.

1. НСЮ4—0,5 н. раствор.

2. Реактив Дише: 1 г дифениламина (перекристаллизованного из 70%-ного этилового спирта) растворяют в 100 мл ледяной уксусной кислоты (х. ч.) и добавляют 2,75 мл концентрированной H2S04.

3. Стандартный раствор ДНК — 0,5 мг/мл. Навеску коммерческого препарата ДНК растворяют в 0,5 н. НС104 и нагревают 15 мин при 70°С; для определения точной концентрации гидролизат разводят в 50 раз 0,5 н. раствором НСЮ4 и измеряют поглощение на спектрофотометре так, как это описано на с. 162.

К 1—2 мл кислотного гидролизата ткани добавляют двойной объем реактива Дише Смесь нагревают в течение 10 мин на водяной бане при 90°С и охлаждают Одновременно проводят реакцию со стандартным раствором ДНК, содержащим от 50 до 500 мкг ДНК в пробе. При нагревании развивается устойчивая синяя окраска. Измеряют поглощение растворов на колориметре при 590 нм. Содержание ДНК в ткани рассчитывают по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору ДНК, с учетом всех разведений

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ РНК С ОРЦИНОМ ПО МЕЙБАУМ

Метод основан на реакции рибозы, входящей в состав РНК, с ор-цином. В результате гидролиза РНК в присутствии соляной кислоты образуется производное фурфурола, дающее при нагревании с орци-ном продукт зеленого цвета Реакция не является высокоспецифичной: окрашенные продукты образуют дезоксирибоза, гексозы, полисахариды, а также некоторые другие соединения, однако чувствительность реакции орцина с рибозой намного выше.

Реактивы:

1. FeCU — 0,1%-ный раствор, приготовленный на концентрированной НС1.

2. Орцин — 0,5%-ный раствор, готовят на растворе FeCl3 (п. 1} перед употреблением.

3 Стандартный раствор РНК —0,1 мг/мл. Навеску коммерческого препарата РНК растворяют в 0,5 н. НСЮ4, кипятят в течение 15 мин и измеряют поглощение на спектрофотометре (с. 162). 4. НС104 — 0,5 н. раствор.

К 2 мл исследуемого раствора, содержащего от 10 до 80 мкг РНК, приливают 2 мл раствора орцина, перемешивают и нагревают 20 мин на кипящей водяной бане. Пробы охлаждают и колориметрируют при 670 нм. Содержание РНК рассчитывают по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору РНК.

4. РАЗДЕЛЬНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РНК И ДНК В ТКАНЯХ (ПО МЕТОДУ ШМИДТА—ТАННГАУЗЕРА)

В основе метода лежит разделение РНК и ДНК путем гидролиза исследуемого материала слабой щелочью, при котором происходит расщепление РНК по З^б'-фосфодиэфирным связям до мононуклеоти-дов. В этих условиях ДНК устойчива к действию щелочи, что делает возможным выделение ее в виде осадка.

Определение РНК

Реактивы:

1. НСЮ4 —концентрированная, 0,2 н. и 2%-ный растворы.

2. КОН — 0,75 н. и 40%-ный растворы.

3. Этиловый спирт.

4. Эфир.

Обработку ткани см. на с. 163. Все операции следует проводить быстро и на холоде, чтобы избежать

страница 83
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
прокат плазм
Компания Ренессанс готовые винтовые лестницы цена - качественно, оперативно, надежно!
кресло ch 540
Магазин КНС Нева предлагает AP-7522-67040-WR - доставка по Санкт-Петербургу и онлайн кредит "не выходя из дома" во всех городах северо-запада России!

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)