химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

дного аниона 2-нитро-5-тио-бензоата, можно, определив оптическую плотность при 412 нм и зная коэффициент молярной экстинкции 2-нитро-5-тиобензоата, определить концентрацию сульфгидрильных групп в анализируемой инкубационной среде.

Если сульфгидрильные группы анализируемого белка высокореак-ционноспособны и легко подвергаются окислению, их определение можно проводить в присутствии восстановителей (дитиотреитола, меркап-тоэтанола). В этом случае к раствору белка, содержащему восстановители, добавляют ДТНБ так, чтобы конечная концентрация реагента в 5—10 раз превышала суммарную концентрацию тиолов в инкубационной среде. После окончания реакции смесь подвергают гель-фильтрации на колонке с сефадексом G-50 или биогелем Р-10 и отделяют белок от смеси низкомолекулярных соединений. К раствору белка, сульфгидрильные группы которого модифицированы ДТНБ, добавляют 3—5-кратный молярный избыток дитиотреитола. Концентрацию освобождающегося аниона 2-нитро-5-тиобензоата определяют по поглощению при 412 нм.

ЛИТЕРАТУРА

1. Торчинский Ю. М. Сера в белках. М., 1977.

2. Кочетов Г. А. Практическое руководство по энзимологии. М., 1980. С. 217.

3. Е11 m a n G. L. Tissue sulfhydryl groups//Arch. Biochem. Biophys. 1959. Vol. 82. P. 70.

4. Fuchs F. The effect of Ca2+ on the sulfhydryl reactivity of troponin: evidence for a Ca2+-induced conformational change//Biochim. Biophys. Acta. 1971. Vol. 226. P. 453.

Б. НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ

Нуклеиновые кислоты — высокомолекулярные биополимеры, обнаруженные во всех типах клеток. Структурными единицами нуклеиновых кислот являются мононуклеотиды, состоящие из гетероциклических азотистых оснований (пуриновых и пиримидиновых), пентоз и фосфорной кислоты. Нуклеиновые кислоты делятся на два типа: рибонуклеиновые (РНК) и дезоксирибонуклеиновые (ДНК)- РНК и ДНК различаются особенностями химического строения входящих в них пиримидиновых оснований и пентоз, локализацией в клетке и функциональным назначением в клеточном метаболизме.

I. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ

Методы количественного определения нуклеиновых кислот основаны на определении содержания составляющих их компонентов: азотистых оснований (как правило, спектрофотометрически благодаря поглощению в ультрафиолетовой области спектра); пентоз (с помощью химических реакций, позволяющих отдельно определять рибозу и дез-оксирибозу) и фосфора нуклеиновых кислот.

1 ?1

1. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СУММАРНОГО СОДЕРЖАНИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ

Методы количественного определения нуклеиновых кислот, основанные на спектрофотометрии в ультрафиолетовой области спектра,, отличаются высокой чувствительностью и простотой проведения анализа. Необходимым этапом различных методов спектрофотометриче-ского определения нуклеиновых кислот является их экстракция из-биологического материала, сопряженная с гипролгзом полинуклеоти-дов. В связи с этим следует иметь в виду, что из исследуемого материала предварительно необходимо удалить свободные нуклеотиды.

В основе модификации спектрофотометрического метода определения суммарного содержания нуклеиновых кислот, разработанной А. С. Спириным, лежит экстракция их из биологического материала горячей хлорной кислотой с последующим определением поглощения экстрактов в ультрафиолетовой области спектра при 270 и 290 нм. Автор предложил также формулу для расчета содержания нуклеиновых кислот.

Реактивы:

1. НС104 — 0,2 н. и 0,5 н. растворы.

Измельченную на холоде навеску ткани (100—200 мг) помещают в центрифужную пробирку с 5—10 мл охлажденного 0,2 н. раствора хлорной кислоты. Содержимое пробирки тщательно перемешивают л осадок отделяют центрифугированием на холоде (3000 g, 10 мин). Центрифугат отбрасывают и осадок повторно отмывают хлорной кислотой. Такая предварительная обработка материала необходима для удаления кислоторастворимых нуклеотидов. После удаления центри-фугата к осадку добавляют 5—10 мл 0,5 н, раствора HCIO4 и, закрыв пробирки пробками с воздушным холодильником, нагревают их в кипящей водяной бане в течение 301 мин. Эта процедура обеспечивает количественную экстракцию нуклеиновых кислот из исследуемого материала и их кислотный гидролиз до растворимых фрагментов. Гидро-лизаты охлаждают и центрифугируют. Осадок подвергают повторной: экстракции 0,5 н. HCIO4. Гидролизаты объединяют и определяют поглощение на спектрофотометре при 270 и 290 нм против контрольного раствора — 0,5 н. раствора НСЮ4. При необходимости гидролизаты разводят тем же раствором.

Рассчитывают содержание фосфора нуклеиновых кислот в I мл исследуемого раствора по формуле:

/-> -^270 -4290

где 0,19 — значение АА (Л27О—А290), которое имеет гидролизат нуклеиновых кислот, содержащий 1 мкг нуклеинового фосфора в 1 мл раствора. При дальнейших расчетах учитывают общий объем гидролизата и разведения. Для пересчета количества нуклеинового фосфора на количество нуклеиновых кислот пользуются средним пересчетным коэффициентом 10,3:

CMKI НК = ^мчг Фн ' 10,3.

Рекомендуется пров

страница 82
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы по веб дизайну с нуля
Глад.комод ARIVA-220
купить вешалку напольную для одежды в икеа
чертеж скамейки со спинкой из профиля

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)