химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

гид, свежеперегнанный.

4. Эфир серный.

5. Реактивы для определения аминокислот с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках «Фиксион» (с. 133).

Препарат белка или пептида в количестве ОД—1 (обычно 0,25) мкмоль помещают в небольшую пробирку со шлифом и краном с отростком и высушивают в вакуум-эксикаторе над Р2О5 и концентрированной H2SO4. К сухому образцу быстро добавляют 0,3 мл безводного гидразина. Пробирку закрывают пробкой с краном, вакуумируют с помощью масляного или водоструйного насоса и помещают в термостат на 8 ч при 105°С. По окончании гидролиза пробирку извлекают из термостата и содержимое освобождают от избытка гидразина упариванием в вакууме (на роторном испарителе). Сухой остаток выдерживают в вакуум-эксикаторе над Р2О5 и концентрированной H2S04 в течение часа. Содержимое пробирки растворяют в 1 мл воды, добавляют 0,3 мл бензальдегида и встряхивают в течение часа. После центрифугирования нижний желтый слой бензальдегида, содержащий гидрази-ды аминокислот, отбирают пипеткой и отбрасывают, а верхний водный слой, содержащий С-концевую аминокислоту, экстрагируют 2 мл эфира и центрифугируют, верхний слой отбрасывают. Операцию повторяют дважды. Обработанный эфиром водный слой упаривают до 0,2— 0,3 мл и используют для идентификации С-концевой аминокислоты любым из описанных выше способов (с. 145).

ЛИТЕРАТУРА

1. Экспериментальные методы исследования белков и нуклеиновых кислот/Под ред. М. А. Прокофьева. М., 1985.

2. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки. М., 1976. С. 291.

3. Неорганическая биохимия. / Под ред. Г, Эйхгорна. М, 1978. Т. 1. С. 504.

4. Бэйли Дж. Методы химии белков. М., 1965.

5. Croft L. Ру. Handbook of protein sequence analysis. Chichester, 1980. P. 117.

6. Schroeder W. Hydrazinolysis//Methods in Enzymology. 1972. Vol. 25B. P. 138.

7. Ambler R. P. Enzymatic Hydrolysis with Carboxypeptidases//Methods in Enzymology 1972 Vol. 25B. P. 143.

3. СУЛЬФГИДРИЛЬНЫЕ ГРУППЫ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ

Важная роль SH-групп белков в различных биохимических и физиологических процессах обусловлена их высокой реакционной способностью и многообразием химических превращений, в которые они вступают (ацилирование, окисление, алкилирование, образование меркап-тидов, полумеркапталей, водородных связей и т. д.).

Для определения количества SH-групп в белках и пептидах наиболее широкое распространение получили следующие методы: амперо-метрическое титрование азотнокислым серебром, титрование /г-хлор-меркурибензоатом (/г-ХМБ) (метод Бойера) и определение при помощи ДТНБ — реагента Эллмана.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧИСЛА СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ЕРУПП МЕТОДОМ ТИТРОВАНИЯ я-ХЛОРМЕРКУРИБЕНЗОАТОМ

Определение основано на том, что /г-ХМБ образует со свободными сульфгидрильными группами меркаптидный комплекс:

R—SH + CI — Hg —{ \— СООН

R —S—Hg — / V_ СООН + НС1.

Полученный меркаптид обладает специфическим поглощением при 250 нм, что позволяет определять количество сульфгидрильных групп в белках и пептидах.

Приготовление раствора «-ХМБ и определение его концентрации спектрофотометрическим методом

Спектрофотометрический метод определения концентрации /г-ХМБ основан на специфическом поглощении его в ультрафиолетовой области спектра (232 нм). Коэффициент молярного поглощения /г-ХМБ равен 1,69-104 М-1-см-1, м. м. — 379 Да.

Реактивы:

1. /г-ХМБ натрия — 5-Ю-4 М раствор.

2. КС1 — 0,5 М раствор, подщелоченный до рН 7,6.

3. КОН — 2 н. раствор.

4. НС1 — 0,5 н. раствор.

Навеску я-ХМБ количественно переносят в мерную колбу (на 25— 50 мл) с 10—20 мл воды, подщелоченной 2 н. раствором КОН. Затем рН раствора доводят на потенциометре до 7,6, добавляя соляную кислоту, и доливают воду до метки. Соляную кислоту следует добавлять по каплям при энергичном перемешивании во избежание временного местного закисления раствора (замечают по помутнению раствора), при котором /г-ХМБ выпадает в осадок. Приготовленный раствор хранят при комнатной температуре; как правило, он пригоден в течение нескольких дней. Время от времени необходимо проверять рН раствора, так как возможно его закисление за счет С02 воздуха и как следствие уменьшение концентрации раствора /г-ХМБ. Если на дне склянки появляется осадок, раствор не пригоден для дальнейшего употребления.

Для определения концентрации полученного раствора /г-ХМБ в две спектрофотометрические кюветы наливают по 2,8 мл раствора КС1.

В одну из кювет (вторая кювета контрольная) добавляют 0,05 мл раствора л-ХМБ, содержимое кюветы тщательно перемешивают пластмассовой палочкой и измеряют оптическую плотность при 232 нм. Затем еще три раза добавляют по 0,05 мл раствора /г-ХМБ, измеряя каждый раз оптическую плотность при 232 нм.

По полученным данным рассчитывают концентрацию /г-ХМБ Сг-хмв по формуле:

Г 4т (2,8+ V)

где V — объем добавленного раствора /г-ХМБ.

1 ГО

ипределение количества сульсргидрильных групп в глутатионе

Трипептид глутатион содержит в своем составе остаток цистеина. Реактивы:

1. Глутатион восстановленный— 1 • 10~3 М раствор.

2. Осталь

страница 80
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
инсталляционная компания
отель сайт петербург
агрегат возд-отоп вода ао2-50 5,5/750
бутсы дёшево не подделка купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(18.12.2017)