химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

чки совпадали. В точку на одной стороне пластины наносят смесь стандартов, а в точку на другой стороне — анализируемый образец. Образец и стандарты наносят в минимальном объеме — 5—10 мкл, постоянно подсушивая место нанесения струей теплого воздуха. Наносят от 0,5 до 3 нмоль дансилированных аминокислот. Пластину ставят в маленькую хроматографическую камеру, следя за тем, чтобы она не касалась стенок камеры, и хроматографируют в растворителе 1. Пластины высушивают в струе теплого воздуха в течение 30 мин и хроматографируют в перпендикулярном направлении в растворителе 2. После высушивания пластины просматривают под ультрахемископом. Обычно описанная процедура обеспечивает разделение почти всех ДНС-аминокислот (рис. 23).

г лиз

2 + 5

иле лей

О ДНС-Мг

про 'бал

л шеи due-тир

_ ф гли

бис - лиз тре

глу

а - тир

асп

ДНС-ОН о

1

1

Рис. 23ч. Расположение дансилированных аминокислот на полиамидной пластине после хроматографии в двух (/, 2—на А) или трех (/—3 — на Б) системах растворителей

Для более полного разделения дансилированных производных треонина и серина, а также производных аспарагиновой и глутамино-вой кислот проводят хроматографию в растворителе 3, в том же направлении, в котором проводили хроматографию в растворителе 2.

гегенерация пластин для повторного использования. Пластины нанизывают на белую нитку и погружают в камеру, заполненную смесью муравьиная кислота — ацетон (1:9) или 1 М NH4OH, приготовленным на 50%-ном ацетоне. Необходимо следить, чтобы пластины не слипались и не прикасались к стенкам камеры. Омывающий раствор желательно постоянно перемешивать. Через 3—5 ч пластины просматривают под ультрахемископом и если они достаточно чисты, их высушивают на воздухе. Необходимо отмывать пластины сразу после проведения эксперимента, так как «застарелые» пластины плохо отмываются и не могут быть использованы повторно. При работе на отмытых пластинах рекомендуется сохранять использовавшееся в преды-дующих экспериментах направление движения растворителей и наносить смесь стандартов на одну и ту же сторону пластины.

ЛИТЕРАТУРА

1. ДэвениТ., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки. М., 1976.

2. Экспериментальные методы исследования белков и нуклеиновых кислот./Под ред. М. А. Прокофьева. М., 1985.

3. Решето в П. Д. Получение полиамидной пленки/ТХимия природных соединений. М., 1971. Т. 1. С. 66.

4. Бэйли Дж. Методы химии белков. М., 1965. С. 136.

5. С г о f t L. R. Handbook of protein sequence analysis. Chichester, 1980.

6. Levin a N. В., Nazimov I. V. High-performance liquid chromatography of DNS-amino acids in the purity control of peptides//.!. Chromatogr. 1984. Vol. 286» P. 207.

2. С-КОНЦЕВЫЕ АМИНОКИСЛОТЫ В БЕЛКАХ И ПЕПТИДАХ

Для определения С-концевых аминокислот в белках и пептидах используют как химические, так и ферментативные методы.

Химические методы основаны главным образом на модификации С-концевых аминокислот. После полного гидролиза полипептидной цепи эти производные отделяют от немодифицированных остатков и идентифицируют. К химической группе методов относятся гидразинолиз, отщепление С-концевых аминокислот под действием изотиоцианата аммония и восстановление этерифицированных белков и пептидов алю-могидридом лития.

При определении С-концевых аминокислот ферментативным путем используют карбоксипептидазы А, В, С и Y. Карбоксипептидаза А при рН 8,025 отщепляет все аминокислоты кроме лизина, аргинина и про-лина; карбоксипептидаза В при рН 8,0 отщепляет только лизин и аргинин; карбоксипептидаза С при рН 3,5 отщепляет кислые, нейтральные и основные аминокислоты, включая пролин; карбоксипептидаза Y при рН 6,0 отщепляет все С-концевые аминокислоты, включая пролин.

25 Для увеличения скорости отщепления остатков аспарагиновой и глутаминовой кислот карбоксипептидазой А рекомендуется проводить гидролиз при рН 4,7.

/

Расщепление белков под действием карбоксипептидаз, а также изотиоцианатом аммония используют и с целью определения С-конце-вой последовательности белков и пептидов. Обычно перед использованием препараты карбоксипептидаз тщательно освобождают от примесей свободных аминокислот, а также производят специальную обработку с целью ингибирования эндопептидаз.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ С-КОНЦЕВЫХ АМИНОКИСЛОТ С ПОМОЩЬЮ КАРБОКСИПЕПТИДАЗ

Реактивы:

1. Карбоксипептидаза А, свободная от примесей аминокислот и эн-допептидаз.

2. Исследуемые белки или пептиды (рибонуклеаза, лизоцим).

3. Аммоний-бикарбонатный буфер 0,2 М или триэтиламмонийби-карбонатный буфер 0,05 М рН 8,0—8Д.

4. Уксусная кислота — 30%-ный раствор.

5. Трихлоруксусная кислота.

6. Ацетон.

7. Реактивы для проведения реакции дансилирования аминокислот (с. 149) или реактивы для определения аминокислот с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах «Фиксион» (с. 133).

Обработка препарата карбоксипептидазы. Для удаления свободных аминокислот суспензию кристаллов карбоксипептидазы А (20 мг/мл) разводят в 4 раза холодной водой и центрифугируют при 2000 g 5 мин при температуре 3-—5°С. Супернат

страница 78
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
краткий курс графического дизайна москва
люди с красными линзами
сковорода томас официальный сайт цены
курсы по кадровому делу в одинцово

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)