химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

е-ДНС-лизин, ДНС-аргинин и ДНС—NH2 (рис. 21). Группы плохо разделяемых производных удается разделить с помощью повторного электрофореза при рН 1,9 (смесь, содержащая 2,5% муравьиной и 7,5% уксусной кислоты).

Идентификация ДНС-аминокислот методом тонкослойной хроматографии на пластинках, покрытых силикагелем

Реактивы ы\

1. Растворитель 1 — ацетон—изопропанол—25%-ный аммиак (18:14:1).

2. Растворитель 2 — ацетон—изопропанол — 25%-ный аммиак (18: 14: 1,4).

3. Растворитель 3 — хлороформ—бензиловый спирт—этил ацетат-уксусная кислота (30 : 20 : 25:1).

4. ДНС-аминокислоты-«свидетели».

5. Силикагель марки КХЖ-200 меш. (с. 70).

6. CaS04 (гипс) (с. 72).

Приготовление пластин. Первый способ. 0,2 г силикагеля тщательно растирают в ступке с 1 мл воды и 100 мг гипса. К полученной пасте добавляют еще 0,8 мл воды и вновь растирают. Полученную однородную суспензию выливают на вымытую и обезжиренную с помощью детергента стеклянную пластинку 6X6 см. Пластинку устанавливают на столик с горизонтальной поверхностью и высушивают в течение ночи на воздухе.

Второй способ. Пластинку погружают в суспензию с легколетучим растворителем. Суспензию силикагеля в хлороформе в соотношении 1:4с добавкой 5(% гипса гомогенизируют 4—5 мин. Тщательно вымытые обезжиренные пластинки погружают в суспензию 2— 3 раза, устанавливают на столике с горизонтальной поверхностью и высушивают 5—10 мин на воздухе при комнатной температуре. Затем пластинку с одной стороны очищают от силикагеля.

24 Все растворители предварительно очищают и перегоняют. Очистку реактивов см. в кн.: Препаративная органическая химия/Под ред. Н. С. Вульфсона. М, 19^5*9.

Разделение ДНС-аминокислот. Разделение проводят на пластинках размером 6X6 см, которые предварительно активируют в термостате при 120°С в течение 30 мин. Анализируемые образцы наносят тонким капилляром в угол пластинки на расстоянии 1 см от ее краев. Диаметр наносимых пятен не должен превышать 0,3—0,5 мм. Объем проб — около 0,5 мкл. На первую пластинку наносят 4-часовой гидролизат, на вторую — 16-часовой, на третью пластинку — смесь ДНС-аминокислот-«свидетелей». Обычно берут стандартные растворы ДНС-производных тех аминокислот, которые входят в состав данного пептида. Пластинки помещают в камеру и проводят разделение вос

I I

ходящим способом сначала в растворителе 1, после этого пластинку выдерживают под тягой в течение 2—3 мин и хроматографируют в том же направлении в растворителе 2. Далее пластинку высушивают в течение 5 мин при 105° С и хроматографируют в перпендикулярном направлении в растворителе 3. Хроматограмму высушивают при 107°С. ДНС-аминокислоты обнаруживают при освещении пластинок ультрафиолетовым светом (с. 149). Пятна переводят на кальку и идентифицируют путем сравнения с пластинками, на которых хроматографиро-вали ДНС-аминокислоты-«свиде-тели».

В описанных условиях хорошо разделяется смесь следующих ДНС-аминокислот: асп, глу, про, сер, гли, три, ала, ди—лиз, лей, иле, ДНС-ОН и ДНС-Ш2 (рис. 22).

Идентификация ДНС-аминокислот методом тонкослойной хроматографии на полиамидных пластинах

Используемые в работе пластины покрыты слоем полиамида с обеих сторон. Они полупрозрачны, что делает возможным нанесение на одну сторону пластины смеси аминокислот-«свидетелей», а на другую — анализируемого образца. После проведения хроматографии пластины просматривают под ультрахемископом и идентифицируют пятна, обладающие подвижностью, одинаковой с подвижностью ами-нокислот-«свидетелей».

Пластины можно использовать многократно. Полиамидные пластины выпускаются промышленностью, но их можно приготовить в лабораторных условиях нанесением слоя полиамида на лавсановую пленку.

Приготовление пластин

Реактивы:

1. Полиамид.

2. Лавсановая пленка.

3. НСООН — концентрированная.

К 88,2 мл перегнанной НСООН добавляют при встряхивании или перемешивании на магнитной мешалке несколькими порциями 22 г полиамида. Для полного растворения полиамида (5—6 ч) добавляют еще 12,5 мл воды (выпадающий осадок в виде белой пленки при дальнейшем перемешивании растворяется).

Лавсановую пленку (40X10 см толщиной 75 мк) обрабатывают наждачной бумагой № 1 до получения матовой поверхности, затем протирают спиртом.

Раствор полиамида выливают в чашку Петри (или кювету) и пленку медленно протаскивают через этот вязкий раствор. Пленку подвешивают над кюветой на" 3—5 мин для стекания избыточного раствора,

а затем помещикл а &амсуу, (касшщспп^ш

пленку вынимают из камеры и высушивают на воздухе в течение 2 3 ч.

Разделение ДНС-аминокислот

Реактивы:

1. Растворитель 1 — 1,75%-ный раствор муравьиной кислоты.

2. Растворитель 2 — толуол-уксусная кислота (9: 1).

3. Растворитель 3 — этилацетат-метанол-уксусная кислота (30: 1 : 1).

4. ДНС-аминокислоты-«свидетели».

5. Полиамидные пластины размером 5x5 см.

В одном из углов пластины на расстоянии ~ 1 см от краев намечают простым карандашом точку старта. Такую же точку ставят с противоположной стороны пластины. Необходимо, чтобы эти то

страница 77
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
турфирмы проводящие обучение туризму
керамическая плитка hannover
gotway mcm4 hs 340wh
вентилятор svf 70-40/35-4d

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)