химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

инокислот наносят в несколько (4—6) точек хроматограммы из расчета 0,01 — 0,06 мкмоль в пятно, триптофан — до 0,1 мкмоль.

После проявления нингидрином полосу хроматограммы, соответствующую каждой из аминокислот (в кислой системе растворителей — растворы № 1 или № 2 — лучше других разделяются пятна лизина, аргинина и валина), вырезают и сканируют на денситометре при 510 нм. Результаты сканирования оценивают либо по площадям полученных пиков, которые рассчитывают путем умножения высоты пика на его ширину на уровне половины высоты, либо по массам ликов. Для этого пики переводят на кальку. Пики на кальке вырезают и взвешивают. По этим данным строят калибровочный график зависимости площади пика (или его массы) от содержания аминокислоты (в микромолях) .

Содержание аминокислот выражают в молях на моль белка (количество остатков на молекулу).

ЛИТЕРАТУРА

1. Жидкостная колоночная хроматография/Под ред. 3. Дейла, К. Мацека, Я. Янака. М., 1978. Т. 2.

2. Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам/Под ред. О. Микеша. М., 1982. Т. 1, 2.

3. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки. М., 1976.

4. Коз арен к о Т. Д., Зуев С. Н., Муляр Н. Ф. Ионообменная хроматография аминокислот. Новосибирск, 1981.

5. Баратова Л. А., Белянова Л. П. Определение аминокислотного состава белков//Методы биохимического эксперимента. М., 1974. С. 3.

6. Остерман Л. А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М., 1985. С. 515.

7. Ш т а л ь Э. Хроматография в тонких слоях. М., 1965.

8. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. М., 1981. Т. 1.

9. Б ей л и Дж. Методы химии белков. М., 1965.

10. Хроматография. Практическое приложение метода/Под ред. Э. Хефтмана, М., 1986. Т. 1.

11. Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков/Под ред. А. Нидервай-зера, Г. Патаки. М., 1974.

МЕТОД СРЕДНЕВОЛЬТНОГО ГОРИЗОНТАЛЬНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА НА БУМАГЕ

Аминокислоты в растворе находятся в виде цвиттерионов. Их заряд, определяемый степенью диссоциации карбоксильных, аминогрупп и боковых радикалов, зависит от рН раствора. Используя метод электрофореза на бумаге, удается провести разделение определенных групп аминокислот. Сложные смеси аминокислот могут быть разделены с помощью электрофорезов, проводимых при разных значениях рН во взаимноперпендикулярных направлениях или комбинацией электрофореза и хроматографии.

Реактивы:

1. Буферный раствор. Муравьиная кислота — уксусная кислота — вода (52:29:919), рН 1,9 (не менее 2 л).

2. Аминокислоты-«свидетели» — 50 мМ растворы отдельных аминокислот в смеси муравьиная кислота — уксусная кислота — вода (7:5:13). Смесь А — равные объемы растворов тирозина, фенилаланина, глутаминовой кислоты, лейцина, серина, алани-на, аргинина и лизина. Смесь Б — равные объемы растворов аспарагиновой кислоты, треонина, пролина, валина, аланина, глицина и гистидина.

3. Ароматографическая бумага: ватман 1, ватман 3 ММ, бумага FN3, FN4, FN5.

4. Раствор для окрашивания (с. 127).

5. Раствор для закрепления краски (с. 127).

6. Раствор для элюции аминокислот с электрофореграмм (с. 127).

Вырезают листы хроматографической бумаги размером 20X Х60 см20. Размер электрофореграммы зависит от конструкции прибора (рис. 20).

5 б

Рис. 20. Схема прибора для сред невольтового электрофореза на бумаге: /—электродные отсеки; 2 — охлаждающая плита, 3 —пакет из полиэтилена, в котором находится хроматографическая бумага; 4— фитиль из фильтровальной бумаги; 5 — подушка из поролона; 6 — прижимная крышка

На расстоянии 10—20 см от одного из краев бумаги простым карандашом проводят линию старта и отмечают на ней 5—6 точек с интервалом 2,5—3,5 см. Бумагу кладут на хроматографический стол или на две стеклянные палочки таким образом, чтобы линия старта оставалась на весу. В отмеченные на линии старта точки наносят исследуемый образец, а также растворы аминокислот-«свидетелей» или их •смеси. Объем наносимого образца не должен превышать 20—60 мкл, при этом содержание каждой аминокислоты в пятне должно составлять 50—150 нмоль.

20 Все операции следует проводить в резиновых перчатках, чтобы исключить попадание аминокислот с кожи пальцев на бумагу.

Образцы наносят на бумагу капилляром или микропипеткой, все время подсушивая зону нанесения. После нанесения образцов бумагу, начиная с краев, увлажняют буферным раствором. При этом следят за тем, чтобы бумага увлажнялась равномерно, а фронты буферного раствора, пропитывающего бумагу слева и справа от линии старта, сошлись бы точно на линии старта. Избыток буфера удаляют фильтровальной бумагой. Избыточное увлажнение бумаги ухудшает разделение Бумагу помещают в специальный полиэтиленовый пакет и кладут на охлажденную плиту прибора для электрофореза. Контакты электрофореграммы с электродными отсеками обеспечиваются с помощью бумажных фитилей, смоченных в буферном растворе. Сверху на электрофореграмму накладывают подушку из поролона, которая специальной крышкой прижимает бумагу к охлаждающей плите и обеспечивает эффективное отведение тепла, выделяюще

страница 70
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
дистанционное обучение на инженера
майгифткард ру/баланс мастеркард
театр у никитских ворот афиша
благодарственное письмо для хореографии

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(15.12.2017)