химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

еделение проводят при 500 нм. Для контроля вырезают чистый участок хроматограммы на том же уровне, что и проявленные пятна, и обрабатывают его так же, как и опытные пробы.

Содержание аминокислот выражают в молях на моль белка (число остатков аминокислоты на молекулу белка). Расчеты делают, исходя из взятой навески белка, его молекулярной массы и количества каждой аминокислоты.

ЛИТЕРАТУРА

1. Хроматография на бумаге/Под ред. И. Хайса, К. Мацека. М., 1962.

2. П а с х и н а Т. С. Количественное определение аминокислот при помощи хроматографии на бумаге//Современные методы в биохимии/Под ред. В. Н. Ореховича. М., 1964. Т. 1. С. 162.

3. Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам/Под ред. О. Микеша. М., 1982. Т. 1.

4. Дэвени Т., Гергей Я- Аминокислоты, пептиды и белки. М, 1976. С. 187.

5. Я кубке Х.-Д., Ешкайт X. Аминокислоты, пептиды и белки. М., 1985.

6. Юферов В. П. О механизме нингидриновой реакции//Усп. биол. хим. 1971. Т. 12. С. 62.

7. Остерман Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот//Электро-форез и ультрацентрифугирование. М., 1981. С. 97.

8. Б э й л и Дж. Методы химии белков. М., 1965. С. 9.

МЕТОД ИОНООБМЕННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Разделение аминокислот этим методом проводят обычно на синтетических смолах-катионитах, представляющих собой сополимеры стирола с дивинилбензолом. Роль ионогенных группировок в них играют сульфогруппы (—S03H). Такие смолы являются сильными электролитами и диссоциируют при любых значениях рН на БОз^-ионы, прочно связанные со смолой, и противоионы Н+, переходящие в раствор. Во избежание закисления буферных растворов, окружающих смолу, ионы Н+ в ней замещают на ионы Na+, т. е. используют смолу в форме S03Na. Для того чтобы осуществить сорбцию аминокислот на смоле путем обмена с ионами Na+, их переводят в форму катионов. С этой целью аминокислоты помещают обычно в Na-цитратный буферный раствор, рН 2,2. При этом значении рН все аминокислоты несут положительный заряд и находятся в виде катионов.

NH3+

/

R

\

СООН

Степень прочности сорбции и десорбции на смоле разных аминокислот, определяемая главным образом величинами зарядов молекул, различна. Наиболее прочно на смоле сорбируются диаминокислоты и наименее прочно — дикарбоновые аминокислоты. Разделение аминокислот при ионообменной хроматографии происходит при десорбции их со смолы элюирующими буферными растворами, отличающимися от исходного буферного раствора большими величинами рН и (или) ионной силы. Обычно для элюции кислых и нейтральных аминокислот используют Na-цитратные буферные растворы с рН 3,25 и 4,25. Для десорбции со смолы наиболее прочно связанных (основных) аминокислот используют более щелочной Na-цитратный буферный раствор со значением рН 5,28 и более высокой ионной силой (0,35 М).

Разделение аминокислот и пептидов с помощью ионообменной хроматографии может быть осуществлено двумя способами: путем хроматографии на колонках и методом тонкослойной хроматографии.

Разделение аминокислот на колонках в настоящее время проводят автоматически в специальных приборах, называемых анализаторами аминокислот.

Современные анализаторы позволяют определять количества аминокислот, исчисляемые в пикомолях (3 пкмоль). Для работы на таких анализаторах требуется 0,1 — 1 нмоль белка. Время анализа 50 мин.

Хроматография на пластинках «Фиксион 50x8» 15

Для разделения аминокислот (гидролизата белка) методом тонкослойной хроматографии широкое применение находят пластинки, покрытые тонким слоем ионообменной смолы полистирольной природы с сульфокислотными группировками (типа «Дауэкс 50X8») или ионообменной целлюлозой. Такие пластинки выпускаются промышленностью, например «Фиксион 50x8» (Венгрия), или могут быть приготовлены в лаборатории. В этих пластинках катионообменная смола находится в Na-форме. Пластинки стабильны в водных и органических растворителях, инертны по отношению к окислителям и восстановителям, но подвергаются воздействию щелочей и концентрированных кислот.

Сочетание при разделении на пластинках «Фиксион» процессов ионообменной и тонкослойной хроматографии обусловливает высокую разрешающую способность этого метода.

Пластинки могут быть использованы для разделения аминокислот, олигопептидов, аминов и др.

Реактивы (готовят на бидистиллированной воде):

11, Аминокислоты-«свидетели» — 50 мМ растворы.

15 Новое название пластинок «Фиксион»—«Лабион».

1. Пластинки «Фиксион 50x8».

2. Лимонная кислота.

3. NaOH.

4. НС1 — концентрированная.

5. Na2HP04.

6. Этиловый спирт.

7. Нингидрин.

8. СН3СООН — концентрированная.

9. НСООН — концентрированная.

1 Q'l

10. Глицерин.

Рис. 18. Уравновешивание пластинки «Фиксион» буферным раствором.

/-пластинка;бумагу и высушивают их на воздухе. Пластинки бумага; 4—стеклянная можно хранить неограниченно долгое время.

палочка (или резиновое кольцо)

Подготовка образца. рН образца должен быть ниже 3 (обычно его доводят до 2). Сухой образец после кислотного гидролиза белка растворяют и наносят на пластин

страница 68
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
изучение впр курсы
прикольные грамоты скачать бесплатно
сколько стоит обучиться на дизайнера одежды
билеты на советский старый новый год

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)