химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ивы:

1. НС1 — 5,7 н. раствор (трижды перегнанная).

Концентрированную НС1 квалификации «химически чистая» (х. ч.) разводят водой в 2 раза и 2 ч кипятят с обратным холодильником над SnCl2 (3—4 г на литр раствора). Затем раствор перегоняют в аппарате со стеклянными шлифами и собирают фракцию при 106—107° С. Перегонку проводят трижды.

2. SnCl2.

3. Фенол (см. с. 168).

К 1—2 мг белка (пептида) в небольшой пробирке добавляют 1 мл 5,7 н. раствора трижды перегнанной НС1 и смесь осторожно, с помощью пастеровской пипетки переносят в тщательно вымытую и высушенную ампулу из толстостенного стекла (1x7 см). Пробирку трижды споласкивают 5,7 н. НС1 (по 0,5 мл); той же пипеткой раствор переносят в ампулу с пробой и добавляют туда кристаллик (либо 1 — 2 капли 5%-ного водного раствора) фенола. Содержимое ампулы замораживают жидким азотом или смесью ацетон — твердая С02, обвязывают марлей, ампулу присоединяют к водоструйному или масляному насосу и отсасывают воздух. Затем содержимое ампулы осторожно размораживают и операцию с откачкой воздуха проводят еще раз (если в лаборатории нет твердой С02 или жидкого азота, отсасывание воздуха из ампулы проводят в течение 10—15 мин после закипания кислоты). После этого ампулу запаивают под вакуумом, ставят в стакан и помещают в термостат при 110° С. Гидролиз проводят в течение 24—48 ч, затем ампулу охлаждают, вскрывают (все операции с ампулой, в том числе и вскрытие, проводят в защитных очках), содержимое переносят в небольшую коническую или круглодонную колбу и соляную кислоту упаривают досуха на роторном испарителе при 40—65° С. Для удаления НС1 добавляют в колбу 1,5 мл воды и снова упаривают. Последнюю операцию повторяют дважды (упаривание в роторном испарителе можно заменить упариванием в вакуум-эксикаторе над гранулированным NaOH (КОН) и Р205). Колбу хранят в вакуум-эксикаторе с NaOH.

ЩЕЛОЧНОЙ ГИДРОЛИЗ Реактивы:

1. NaOH — 2 н. раствор.

2. Натрий-цитратный буфер, рН 3,3 (0,4 М по Na+):

лимонная кислота — 84 г,

NaOH НС1 (37%)

н2о

— 16 г.

— 5,9 мл,

— до 1 л.

3. НС1 — 5,7 н. раствор.

К Ю мг белка (пептида) в небольшой пробирке добавляют 1 мл 2 н. раствора NaOH и раствор с помощью пастеровской пипетки переносят в ампулу для гидролиза (с. 124). Пробирку дважды споласкивают 2 н. NaOH по 0,5 мл; той же пипеткой раствор переносят в ампу-* лу с пробой. Ампулу вакуумируют и запаивают. Техника удаления воздуха из ампулы и ее запаивания та же, что и при кислотном гидролизе белка. Гидролиз проводят при 110°С в течение 5 ч. По окончании гидролиза ампулу охлаждают, вскрывают и добавляют 1,6 мл натрий-цитратного буферного раствора рН 3,3 и 1 мл 5,7 н. раствора НС1. Полученный гидролизат используют для идентификации и количественного определения аминокислот.

ЛИТЕРАТУРА

1. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки. М„ 1976. С. 165.

2. Остерман Л. А, Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М., 1985. С. 525.

3. Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков / Под ред. Нидервайзера,. Г. Патаки. М., 1974.

4. Баратова Л. А., Белянова Л. П. Определение аминокислотного состава белков/Методы биохимического эксперимента. М., 1974. С. 3.

5. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э. Основы биохимии. М., 1981. Т. 1. С. 166.

6. Бэйли Дж. Методы химии белков. М., 1965. С. 117.

2. РАЗДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ АМИНОКИСЛОТ

Наиболее совершенным методом для количественного анализа аминокислотного состава белков и пептидов в настоящее время является их определение с помощью автоматических приборов — анализаторов аминокислот. Разделение аминокислот в них происходит по типу ионообменной хроматографии на колонках, заполненных сульфо-полистирольными катионитами (с. 132). Этот метод был описан в 1958 г. Спекманом, Муром и Стайном. При отсутствии таких приборов или в случае анализа несложной смеси аминокислот, состоящей из малого числа компонентов, используют технику электрофореза на бумаге или в тонком слое и различные виды хроматографии: газовую (с помощью газовых хроматографов), распределительную (бумажную) и ионообменную в тонком слое.

МЕТОД ХРОМАТОГРАФИИ НА БУМАГЕ

Хроматография на бумаге — один из видов распределительной хроматографии (с. 45).

При разделении аминокислот и пептидов обычно пользуются трех-компонентными системами: к насыщенному водой органическому растворителю добавляют кислоты, основания, некоторые спирты, кетоны и др. Это приводит, во-первых, к повышению растворимости воды в подвижной фазе (увеличению гидрофильности системы), во-вторых, к изменению диссоциации кислых и основных групп разделяемых соединений. Вследствие этого кислоты замедляют движение оснований, а основания — кислот.

На практике для разделения аминокислот и пептидов основного характера используют системы, содержащие фенол и крезол, для нейтральных — смеси с бутиловым спиртом и уксусной кислотой или с амиловым спиртом, а для кислых аминокислот и пептидов — системы, содержащие соединения основного характера (обычно пиридин). Если соединение плохо растворимо в подвижной фазе и оста

страница 64
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
поселок голева на новой риге
fda221 siemens
сумочницы для кафе
заправка чиллера ebara

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(21.09.2017)