химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

учению аминокислотного состава предшествует, как правило, определение однородности изучаемых препаратов. О чистоте препаратов белка судят на основании данных ультрацентрифугирования, электрофореза, в частности диск-электрофореза

122 ^

(иногда в присутствии додецилсульфата натрия), хроматографии на колонках, а также по числу N- и С-концевых аминокислот и др.

При изучении химической структуры биологически активных белков, например ферментов, важное значение имеет определение различных функциональных групп белковой молекулы: SH-rpynn, ОН-групп серина и треонина, e-NH2-rpynnbi лизина, имидазольного дикла гистидина и др.

1. ГИДРОЛИЗ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ

Определение качественного и количественного аминокислотного состава белков и пептидов проводят после их гидролиза кислотой или щелочью. Оба вида гидролиза разрушают некоторые аминокислоты. При щелочном гидролизе частично разрушаются цистеин, серии, треонин и происходит частичная рацемизация некоторых аминокислот. При гидролизе соляной кислотой (5,7 н., 105—110° С), которая обычно используется при кислотном гидролизе пептидных связей, практически полностью разрушается триптофан. В связи с этим содержание триптофана в пробах обычно определяют после щелочного гидролиза или спектрофотометрическим методом10. Кроме того, наблюдаются значительные потери оксиаминокислот (серина, треонина, тирозина), се-русодержащих аминокислот (цистеина, метионина) и частично пролива. При этом степень разрушения аминокислот зависит от чистоты и концентрации НС1, используемой для гидролиза, а также длительности и температуры гидролиза. Следует отметить, что примеси альдегидов при кислотном гидролизе приводят к значительной потере тирозина, а также цистеина, гистидина, глутаминовой кислоты и лизина, а примеси углеводов в больших концентрациях — к разрушению ар-" гинина.

10 Определять триптофан можно и после кислотного гидролиза белка в смеси

соляной и 2—4%-ной тиогликолевой кислот.

11 Для кислотного гидролиза белков и пептидов помимо 5,7 н. НС1 используют

также сульфокислоты. Более легкому гидролизу пептидных связей, образованных гидрофобными аминокислотами, способствует проведение гидролиза в смеси концентрированной НС1 и сильной органической кислоты, например трифторуксусной (2 . 1).

Время гидролиза в этом случае ограничивается 25, 50 и 75 мин. Температура гидролиза 166°С.

1 оо

Снижению потерь большинства аминокислот при кислотном гидролизе способствует проведение его в стеклянных ампулах под вакуумом с большим избытком (200—5000-кратным) тщательно очищенной и перегнанной над SnCl2 соляной кислоты. Распад тирозина предупреждают добавлением в ампулу фенола. Чтобы избежать превращения серусодержащих аминокислот в продукты различной степени окисления при гидролизе и последующих процессах хроматографии и электрофореза, образцы белка, содержащие цистеин и цистин, до гидролиза обрабатывают надмуравьиной кислотой. При этом образуется стойкое производное — цистеиновая кислота. Гидролиз проводят в течение 24, 48, 72 и 120 ч. Если содержание какой-либо аминокислоты с увеличением времени гидролиза постепенно уменьшается, его находят на графике зависимости содержания этой аминокислоты от длительности гидролиза путем экстраполяции к нулевому времени гидролиза. Если же содержание аминокислоты в ходе гидролиза постепенно увеличивается, истинную величину также определяют графически, ограничивая время гидролиза 96 или 120 ч и.

Во избежание разрушения аминокислот после окончания гидролиза за счет наличия в гидролизатах свободной минеральной кислоты, а также гуминовых веществ следует как можно быстрее удалить последние из гидролизата. Гуминовые вещества удаляют фильтрованием, а НС1 — упариванием в вакууме (обычно на роторном испарителе).

Окисление белка надмуравьиной кислотой

Реактивы:

1. НСООН - 85%-ный раствор.

2. Н202 — 30%-ный раствор.

Надмуравьиную кислоту готовят из 85%-ной НСООН и 30%-ной Н202, смешивая их в соотношении 9:1 в сосуде с притертой пробкой. Смесь выдерживают в течение 5 мин при комнатной температуре и затем 10—15 мин на холоде (0°С) (можно выдерживать 30 мин лишь при комнатной температуре). При получении надмуравьиной кислоты сосуд плотно закрывают пробкой со шлифом, смазанным смазкой. Остаток кислоты выливают после разбавления водой под тягой и смывают большим количеством воды.

Внимание! Надмуравьиная кислота является сильным окислителем. Поэтому всю работу с ней проводят под тягой.

К образцу белка добавляют 1—2 мл надмуравьиной кислоты и оставляют в закрытом сосуде в течение часа на холоде. После этого содержимое сосуда разводят водой в 50 раз и высушивают образец лиофилизацией или на роторном испарителе. Во избежание попадания сильного окислителя в приборы образцы белка можно высушивать в специально отведенном для этих целей вакуумном эксикаторе над NaOH. В этом случае раствор белка в надмуравьиной кислоте разбавляют равным объемом воды и выпаривают. Процедуру с добавлением воды и выпариванием над NaOH повторяют 3 раза.

КИСЛОТНЫЙ ГИДРОЛИЗ Реакт

страница 63
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Ручки Золото глянец/матовое золото
анализ крови на инсулин цена
5 seconds of summers
колонки подвесные для домашнего кинотеатра

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.06.2017)