химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

. Обработку исходным буферным раствором осуществляют до тех пор, пока не произойдет выравнивания рН элюата на выходе из колонки (или жидкости, в которой суспендируют ионит) с рН исходного буферного раствора. Уравновешивание — процесс медленный. Для его ускорения ионит можно сначала обработать раствором того же состава, что и исходный, но с большей концентрацией, а после достижения нужного значения рН уравновешивание продолжают исходным раствором. Другой способ уравновешивания заключается в том, что ионит суспендируют в исходном буферном растворе до получения достаточно жидкой суспензии. Добавлением раствора, содержащего соответственно кислый или основной компонент исходного буфера, доводят рН (на рН-метре) до нужного значения. Затем сорбент уравновешивают исходным буферным раствором. Во всех случаях конечное состояние равновесия (величину рН) необходимо контролировать.

Регенерация. Ионообменники можно использовать многократно. Поэтому по окончании работы их следует регенерировать. Для этого к использованному сорбенту добавляют 30-кратный объем 0,2—0,5 н. раствора NaOH, перемешивают до получения однородной суспензии и фильтруют на воронке Бухнера. Обработку щелочью проводят дважды. После этого ионит отмывают водой до нейтральной реакции фильтрата. Регенерированный ионообменник уравновешивают соответствующим буферным раствором.

Хранение. Ионообменники на основе целлюлозы и декстрана можно хранить во влажном состоянии непродолжительное время. Ани-ониты лучше хранить в солевой форме (не в ОН~*-форме), катиониты хранят в солевой форме и в Н+-форме, При хранении набухших иоио-обменников к ним добавляют антисептики (с. 108); при добавлении толуола (нескольких капель на литр) следует помнить, что толуол поглощает при 280 нм, а растворимость его в некоторых буферах, например в трис-буфере, достаточно высока.

Подготовка и заполнение колонки. Колонку заполняют суспензией ионита в элюирующем буферном растворе (с. 103). Заполнение колонки можно проводить и суспензией ионита в воде и лишь после уплотнения слоя сорбента уравновешивать колонку элюирующим буферным раствором. Над верхним слоем сорбента всегда должен оставаться слой жидкости не менее 2 см.

Подготовка исследуемого материала. Раствор белка, наносимый на колонку, должен иметь тот же состав и те же значения рН и ионной силы, что и исходный буферный раствор, которым уравновешен ионообменник. Образец переводят в исходный буферный раствор, подвергая его предварительно диализу или гель-хроматографии. Если объем пробы, предназначенный для ионообменной хроматографии, невелик, образец можно развести исходным буферным раствором. Нерастворимые компоненты удаляют центрифугированием или фильтрованием. Если

ПО

исследуемый белок связывается с ионообменником прочно, объем наносимого белкового раствора значения не имеет, если он связывается слабо, наносимый объем должен быть по возможности небольшим.

Элюция белков с колонки. Скорость протекания элюента по колонке при ионообменной хроматографии сказывается на результатах разделения. При медленном токе жидкости, например порядка S мл/см2-ч, разделение лучше, чем при токе жидкости через ту же колонку со скоростью 20 мл/см2-ч. На разделительной способности колонки сказыва--ется и крутизна создаваемого градиента элюции: чем круче градиент, тем острее пики на кривой элюции, однако лучшему разделению способствует более пологий градиент.

Разделение белков сыворотки крови на ДЭАЭ-целлюлозе

ДЭАЭ-целлюлоза благодаря своим функциональным группам —• диэтиламиноэтильным остаткам [—СН2—СН2—N=(C2H5)2] — в водном растворе обладает свойствами слабого анионита. Используется для хроматографического фракционирования кислых и нейтральных белков.

Фракционирование белков сыворотки крови можно проводить с использованием градиентной или ступенчатой элюции. Сорбцию белков на колонке осуществляют при рН 5,65. При этом значении рН белки сыворотки крови могут сорбироваться на слабых анионитах.

Реактивы:

1. НС1 — 0,5 н. раствор.

2. NaOH — 0,5 н. раствор.

3. ДЭАЭ-целлюлоза.

4. Натрий-ацетатный буфер — 0,02 М, ОД М и 0,5 М растворы, рН 5,65.

5. NaCl — 0,3 н. раствор, приготовленный на 0,02 М натрий-ацетатном буфере.

6. NaCl — 0,5 н. раствор, приготовленный на 0,5 М натрий-ацетатном буфере.

Подготовка сорбента. Около 10 г ДЭАЭ-целлюлозы обрабатывают и переводят в ОН~-форму (с. 109).

После освобождения от мелких и крупных частиц 6 ее суспендируют дважды в избытке 0,1 М натрий-ацетатного буферного раствора (рН 5,65), выдерживая каждый раз в буфере по 30 мин. Избыток жидкости удаляют декантацией. После второго суспендирования смесь вносят в колонку.

Подготовку и заполнение колонки см. на с. 102. Размер колонки 1,5X20 см. По окончании заполнения колонки ионит уплотняют либо поршнем, либо давлением воздуха до получения постоянной высоты столба геля. Затем колонку уравновешивают исходным элюирующим «буферным раствором 0,02 М натрий-ацетатным буфером (рН 5,65), пропуская его через колонку медленно (при данных размерах колонки со

страница 56
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
волейбольные кроссовки
купить виниловые наклейки на темное авто
j pop концерты в москве 2017
как отрихтовать переднее крыло ваз 2104 не снимая

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.07.2017)