химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

тоды очистки белков. М., 1985.

7. Хроматография. Практическое приложение метода/Под ред. Э. Хефтмана. М., 1986.

8. May pep Г. Диск-электрофорез. М., 1971.

9. Паспорт-инструкция к использованию аппарата для вертикального гель-электрофореза. Таллинн, 1984

10. Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение. М., 1986.

11. Электрофоретические методы анализа белков/Под ред. Р. К. Саляева, П. Д. Ре-шетова. Новосибирск, 1981.

12. Успенская В. Д. Электрофорез белков в крахмальном блоке//Современные методы в бнохимии/Под ред. В. Н. Ореховича. М., 1964. Т. 1. С. 87.

13. Гурвич А. Е. Электрофорез сыворотки на бумаге//Современные методы в биохимии/Под ред. В. Н. Ореховича. М., 1964. С. ПО.

14. Я кубке X. Д., Ешкайг X. Аминокислоты, пептиды и белки. М., 1985.

15. Фрайфелдер Д. Физическая биохимия. М„ 1980.

16. Методы практической биохимии/Под ред. Б. Уильямса, К. Уилсона. М., 1978.

2. РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ

По механизмам разделения хроматографию подразделяют на адсорбционную (газовую или жидкостную), осадочную, ионообменную, распределительную, гель-фильтрационную (гель-хроматографию) и биоспецифическую \афинную); по форме проведения — на колоночную, хроматографию на бумаге и в тонком слое. Для фракционирования белков применяется главным образом хроматография на колонках.

ОБЩИЕ ПРИЕМЫ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ НА КОЛОНКАХ

Простейшее устройство для хроматографического разделения на колонках изображено на рис. 12. Колонки (рис. 13, 1) — полые стеклянные трубки, размер которых зависит от целей работы и способа разделения. В основание колонки впаивают пористую стеклянную плаРис. 12. Схема устройства для колоночной хроматографии. 1 — прибор для создания линейного градиента {а — сосуд с раствором высокой концентрации; б — сосуд-смеситель; в — магнитная мешалка); 2— перистальтический насос; 3— колонка; 4 — УФ-детектор; 5 — коллектор фракций

стинку или перфорированный диск (2). Необходимо следить за тем, чтобы «мертвое» пространство под диском, между ним и основанием колонки, а также внутренний диаметр шлангов, по которым выходящий из колонки элюат поступает в коллектор фракций (рис. 12,5), было минимальным. В противном случае происходит смешивание уже разделенных веществ. Коммерческие колонки (рис. 13, Б) снабжены специальными приспособлениями — концевыми адаптерами переменной длины (10), которые позволяют регулировать длину колонки и сводят к минимуму перемешивание элюируемых фракций.

Заполнение колонки имеет большое значение для успешного разделения исследуемых веществ. Колонку укрепляют строго вертикально, закрывают нижний кран (зажим) (рис, 13,4) и наливают в нее примерно на 1/3 ее объема дистиллированной воды. Энергичными движениями стеклянного поршня (рис. 13,5) освобождают пространство под

1

Рис. L3. Хроматографические колонки упрощенного (Л) и усложненного (Б) варианта.

/ — стеклянная колонка; 2 — перфорированный диск; 3 — пробка со стеклянной трубкой; 4, 7 — кран-зажим; 5, 9 —верхний резервуар; 6 — буферный раствор над гелем; 8 — стеклянный поршень; 10— адаптеры; 11—сетка из нейлона; 12 — капиллярный шланг, соединенный с регистрирующим устройством и (или) коллектором фракций

10.1

диском от пузырьков воздуха. На диск с помощью поршня помещают кружок фильтровальной бумаги, по размерам точно соответствующий внутреннему диаметру колонки. Поршень осторожно вынимают, следя за тем, чтобы в колонку не попали пузырьки воздуха. Через воронку или по палочке наливают в колонку густую, тщательно взмученную взвесь используемого сорбента (смолы или геля) так, чтобы жидкость стекала по стенке колонки и не увлекала в свою толщу пузырьков воздуха. Суспензии дают осесть, через несколько минут открывают кран и продолжают наполнение колонки, постепенно подливая следующие порции взвеси. Во избежание слишком сильного уплотнения сорбента заполнение колонки производят при небольшом давлении (особенно важна следить за этим при работе с гелем сефадекса). Давление определяет величина h (рис. 13, Л) — разница между уровнем жидкости над сорбентом в колонке (или присоединенном к ней верхнем резервуаре) и положением конца шланга, по которому элюат вытекает из колонки. Необходимо сделить за тем, чтобы наполнение колонки было равномерным.

Заполнив колонку до нужной высоты, закрывают нижний кран (зажим) и дают суспензии осесть, не допуская «высыхания» наполнителя в колонке (для этого над верхним слоем сорбента всегда должен находиться слой растворителя). Следят также за тем, чтобы верхний слой наполнителя имел гладкую горизонтальную поверхность. Для уменьшения взмучивания верхнего слоя при внесении в колонку образца над ним иногда помещают кружок фильтровальной бумаги или поролона. Колонку закрывают пробкой с отводом или со стеклянной трубкой и присоединяют к резервуару (рис. 13,5), содержащему элюирующий раствор. Для поддержания постоянного давления и сохранения постоянной скорости тока жидкости через колонку используют склянку Ма-риотта или насосы р

страница 52
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы 1с торговля склад 8.3 г.москва вао
заказать линзы недорого
купить итальянскую кухню верона в москве
сколько стоит отучиться на парикмахера в москве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)