химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ственно переносят в мерные колбы на 25—50 мл, осторожно нейтрализуют до слабокислой реакции на метиловый красный (индикатор добавляют в пробу, следя за тем, чтобы реакция не стала щелочной) и доводят водой до метки Из раствора берут пробы для определения аммиака.

Изотермическая перегонка. Перед заполнением на шлиф чашки наносят вакуумную смазку или смесь из воска и вазелина. Во внутренний цилиндр наливают 1 мл 0,005—0,01 н. кислоты, чашку слегка наклоняют и во внешний цилиндр помещают 1 мл исследуемого раствора (необходимо следить за тем, чтобы раствор не растекался по всей поверхности чашки). Возвращают чашку в горизонтальное положение и, придерживая левой рукой крышку, в противоположный конец внешней части чашки наливают 1 мл насыщенного раствора углекислого калия. Чашку быстро закрывают и вращательными движениями перемешивают содержимое внешнего цилиндра. Ставят на 2 ч в термостат при 37 °С или оставляют при комнатной температуре на 24 ч. После этого определяют количество аммиака во внутреннем цилиндре методом титрования или с реактивом Несслера.

Определение аммиака методом титрования. Во внутренний цилиндр •чашки добавляют 1—2 капли индикатора Ташира и титруют раствором щелочи до появления зеленого окрашивания. При правильном приготовлении индикатора переход окраски от фиолетовой к зеленой происходит от одной капли щелочи. По разности в количестве щелочи, пошедшей на титрование контрольной и опытной проб, рассчитывают количество аммиака в исследуемом растворе, учитывая, что 1 мл 0,01 н. раствора H2S04 связывает ОД4 мг азота. По количеству найденного азота рассчитывают количество белка в опытной пробе.

Определение аммиака с реактивом Несслера. Определение основано на том, что реактив Несслера с аммиаком образует красно-коричневый осадок При очень небольших количествах аммиака осадка не образуется, а раствор приобретает желтый с коричневым цвет; интенсивность окраски зависит от количества аммиака.

Из внутреннего цилиндра чашки Конвея отбирают в пробирку 0,2 (0,3) мл раствора. Приливают туда 9,5 (9,4) мл 0,002 н. H2S04 и 0,3 мл реактива Несслера. Содержимое пробирки тщательно перемешивают, оставляют на 5 мин при комнатной температуре и колориметрируют

яри 540 нм. Для построения калибровочного графика используют 0,01 н. раствор сернокислого аммония.

На основании полученных результатов рассчитывают количество белка в опытной пробе (с. 85).

МИКРОМЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЗОТА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ (ПО ЕНИКЕ)

Метод основан на образовании индофеноловой сини при конденсации аммиака в щелочной среде с фенольным реагентом (реакция Берт-ло). Образующуюся синюю окраску измеряют на колориметре при 578 нм.

Реактивы:

1. Фенольный реактив: 1 мл 85%-ного раствора фенола, 2,5 мл 0,2%-ного раствора нитропруссида натрия и 36,5 мл Н20. Реактив хранят в темной склянке в холодильнике. Стабилен в течение нескольких недель.

2. Щелочной раствор гипохлорита: 0,02 М раствор NaOCl в 2,5 н. растворе NaOH. Титр основного раствора гипохлорита проверяют йодометрическим титрованием. Раствор стабилен при хранении в холодильнике.

3. Стандартный раствор азота: 0,01 М раствор (NH4)2S04.

4. НСЮ4 — 57%-ный или 5 н. растворы.

Минерализация биологического материала. Пробы, содержащие азот, подвергают сжиганию в присутствии хлорной кислоты (0,06 мл 57%-ного раствора или 0,1 мл 5 н. раствора НСЮ4). Минерализацию проводят в термостойких пробирках, которые помещают в песчаную баню или специальный алюминиевый блок с отверстиями для пробирок.

сличала выпаривают n2u при нич^, затем продолжают сжигание при 205—215 °С в течение 20 мин. Пробирки охлаждают при комнатной температуре.

Определение азота. В пробы добавляют по 1,0 мл Н20 и фенольно-го реактива, 0,4 мл щелочного раствора гипохлорита и сразу же содержимое пробирок тщательно перемешивают круговыми движениями. Оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Оптическую плотность определяют колориметрически против пробы, не содержащей азота.

Для построения калибровочного графика в 6 пробирок вносят стандартный раствор (NH4)2S04, содержащий от 0,02 до 0,2 мкмоль азота, доводят водой до 1,0 мл, приливают по 0,06 мл 57%-ного раствора НСЮ4 и перемешивают. Дальнейший ход определения, как для исследуемых образцов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Б ей л и Дж. Методы химии белков. М-, 1965. С. 265.

2. Штрауб Ф. Биохимия. Будапешт. 1965. С. 62.

3. Кочетов Г. А. Практическое руководство по знзимологии. М., 1980. С. 222.

4. Плехан М. И. Спектрофотометрия биуретовых комплексов как метод исследования полипептидов и белков//Химия белка. М., 1961. С. 191.

5. Б а й е р Е. М. Некоторые данные о применимости метода Лоури в зависимости от различных условий определения белка//Лабораторное дело. 1976. № 10. С. 590.

6. Белов П. Применение 18-вольфрамо, молибдено-фосфорного аммония для определения белка по методу Лоури//Лабораториое дело. 1975. № 5. С. 303.

7. Балаховский С. Д., Балаховский И, С. Методы химического анализа крови. М., 1953.

8. Скоупс Р. Методы очистки белков. М., 1985.

9

страница 44
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы графического редактора
Casio W-752-2B
курсы массажа обучение
скамья мягкая для посетителей эконом класса тюмень

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(05.12.2016)