химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

тометрическую кювету с длиной оптического пути 1 см вносят 0,2—1,0 мл суспензии иммобилизованного на сефарозе белка и добавляют 50%-ный раствор полиэтиленгликоля до общего объема 3 мл. После тщательного перемешивания смеси (пузырьки воздуха должны быть полностью удалены) измеряют оптическую плотность при 280 нм, используя в качестве контроля раствор полиэтиленгликоля, смешанный с соответствующим количеством неактивированной сефарозы. Содержание белка в препаратах определяют по калибровочному графику, построенному с использованием смеси раствора полиэтиленгликоля с суспензией неактивированной сефарозы после внесения различных количеств стандартного раствора белка (10—20 мкг). Для построения калибровочного графика необходимо использоШЩВть в качестве стандарта именно iui ислил, ^иш^ош пал^^^п. » 1 исследуемом препарате в иммобилизованном состоянии.

КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПО МОДИФИЦИРОВАННОМУ МЕТОДУ БРЭДФОРД

Реактивы

'т( 1. Раствор красителя кумасси G-250 (с. 83).

Г,. 2. Суспензия сефарозы с иммобилизованным белком.

3. Суспензия неактивированной сефарозы. ; 4. Стандартный раствор белка 0,2—1,0 мг/мл.

В спектрофотометрическую кювету с длиной оптического пути 1 см * вносят 0,1 мл суспензии иммобилизованного на сефарозе белка, добавляют 2 мл раствора кумасси, перемешивают при комнатной температуре 2—3 мин и быстро измеряют оптическую плотность смеси при -595 нм, используя в качестве контроля кювету, содержащую 0,1 мл суспензии неактивированной сефарозы и 2 мл красителя. Для построения калибровочного графика к 0,1 мл суспензии неактивированной се-"фарозьь добавляют от 2 до 20 мкг исходного препарата белка и 2 мл раствора красителя, а затем измеряют оптическую плотность. С помощью данного метода можно определить содержание белка в препаратах иммобилизованных ферментов, содержащих более 10 мкг белка в 1 мл суспензии.

ЛИТЕРАТУРА

3. Golovina Т. О. et al. A convenient method for the estimation of sepharose—

bound protein//Anal. Biochem. 1977. Vol. 83, N 2. P. 778. 5. As г у ants R. A. et al. Determination of sepharose-bound protein with coomassie brilliant biue G-250//Anal. Biochem. 1985. Vol. 151, N 2. P. 571.

4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПО АЗОТУ

Определение основано на том, что содержание азота в большинстве белков практически одинаково и может быть принято равным 16%. По количеству определенного азота находят количество белка в пробе. При нагревании органического соединения с концентрированной серной (хлорной) кислотой происходит его минерализация, азот переходит в сернокислый аммоний (перхлорат аммония), и его можно определить количественно.

Из существующих разновидностей метода в настоящем руководстве предлагается проводить определение содержания азота в биологическом материале путем изотермической перегонки (метод Конвея), позволяющим открывать от 1 до 10 мкмоль азота в пробе, и микрометодом (по Енике), чувствительность которого от 0,02 до 0,2 мкмоль азота в пробе.

ИЗОТЕРМИЧЕСКАЯ ПЕРЕГОНКА АММИАКА (МЕТОД КОНВЕЯ)

Аммиак, вытесненный из растворов солей аммония сильными щелочами, поглощается раствором кислоты известной концентрации. Оставшуюся кислоту титруют щелочью (или образующийся сернокислый аммоний подвергают несслеризации) и вычисляют содержание аммиака в исследуемой пробе. Разложение солей аммония и поглощение аммиа j „ , UUU^UMVIUUA -i« IJJ na ivi fl l\UtlDCM

(рис. 7). *1ашки напоминают кристаллизатор с низкими стенками, в центральную часть которого впаян внутренний цилиндр. Чашка плотно

закрывается стеклянной крышкой, пришлифованной к внешнему цилиндру.

Реактивы:

1. H2S04 или HCI — 0,005 или 0,01 н. растворы, концентрированная H2S04

2 NaOH — 0,005 или 0,01 н растворы.

3 К2СО3 (поташ) — насыщенный раствор (может быть заменен 10%-ным NaOH).

Рис. 7. Чашка Конвея 4 Индикатор Ташира (смесь

метилового красного и метиленовой сини). Окраска метилового красного на фоне метиленовой сини в кислом растворе будет фиолетово-красной, в щелочном — зеленой.

Основной раствор- 40 мл 0,1%-ного спиртового раствора метилового красного и 10 мл 0,1%-ного спиртового раствора метиленовой сини.

Рабочий раствор: 1 объем основного раствора, 1 объем спирта и 2 объема воды. 5. Реактив Несслера — щелочной раствор комплексной соли ртути [KsHgUlJ

Приготовление реактива Несслера. 10 г KI растворяют в 15 мл воды, добавляют 15 г Hgl2, тщательно перемешивают и туда же приливают 80 мл 50%-ного раствора NaOH (не содержащего углекислых солей). Перемешивают и общий объем доводят водой, не содержащей СОг, до 500 мл. Оставляют на сутки, после чего фильтруют через стеклянную вату. Раствор должен быть прозрачным.

Минерализация биологического материала. Пробу, содержащую

10—20 мг белка, помещают в колбу Кьельдаля, добавляют 0,5 мл концентрированной серной кислоты и проводят минерализацию (с. 44). Для учета количества аммиака в реактивах и воде параллельно опытным пробам ставят контрольные, в которых минерализации подвергается дистиллированная вода. После этого пробы количе

страница 43
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
оформление зала для торжеств
Кликни на ссылк и получи скидку в КНС по промокоду "Галактика" - Картриджи Т2 - онлайн кредит "не выходя из дома" по всему РФ!
курсы повышения квалификации по окраске волос
ангельские глазки на бмв х5 е53 лампа

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)