химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ЩИЕ СОЕДИНЕНИЯ

Второй раздел практикума ставит своей целью познакомить студентов с особенностями выделения, фракционирования, идентификации и количественного определения различных природных азотсодержащих соединений, белков, пептидов, аминокислот, нуклеиновых кислот, нуклеотидов и пр Предлагаемые экспериментальные работы включают наиболее широко используемые в лабораторной практике современные методы разделения и анализа этих соединений: различные виды электрофореза, хроматографии, спектрофотометрии, колориметрии и др. Работа проводится как на готовых коммерческих препаратах высоко- и низкомолекулярных азотсодержащих соединений, так и на препаратах, выделяемых студентами из различных тканей лабораторных животных.

Предлагаемые в данном разделе методы имеют общий характер и используются студентами при выполнении задач последующих разделов практикума, в частности в разделе «Препаративная энзимология» я др

Навыки, получаемые в данном разделе практикума, имеют основополагающий характер и должны помочь будущим молодым специалистам в овладении технически более сложными методами, применяемыми в современной биохимии и молекулярной биологии. Работа студентов в данном разделе построена таким образом, что отдельные методы исследования осваиваются не независимо, а объединяются в задачи, подчиненные определенной научной цели, например1) определение чистоты препарата, молекулярной массы и аминокислотного состава белка (рибонуклеазы, лизоцима, гистонов и др );

чистоту оценивают по количеству белка в препарате, электрофорезом в

лолиакриламидном геле и определением N- или С-концевых аминокислот; молекулярную массу анализируют гельхроматографией на колонке и в тонком слое, а также электрофорезом в присутствии ДСН; аминокислотный состав определяют после гидролиза электрофорезом на

бумаге или хроматографией;

2) определение азотсодержащих соединений в сыворотке крови; задача включает определение общего азота, белка, фракционирование белков электрофорезом на бумаге, в полиакриламидном и агаровом гелях, ионообменной и адсорбционной хроматографией на колонках; определение N- или С-концевых аминокислот и молекулярной массы сывороточного альбумина; определение свободных аминокислот;

3) выделение ДНК (или РНК) из ткани печени и определение их иуклеотидного состава, задача включает выделение ДНК (РНК) и определение их количества спектрофотометрическим и колориметрическим методами; гидролиз ДНК (РНК) и анализ иуклеотидного состава методами электрофореза и хроматографии на бумаге, а также в тонком слое, разделение рестриктов ДНК фага к электрофорезом в геле ага-розы или расщепление РНК рибонуклеазой и анализ фрагментов;

4) получение препарата АДФ и характеристика его чистоты; задача включает выделение миозина, характеристику его активности и числа

^ji'i^juu, uwijn-ппс ijppaiMcmuH мии^ина фермсиштивным путем; гидролиз АТФ миозином и выделение АДФ методом ионообменной хроматографии на колонке; анализ полученного препарата АДФ электрофоре-тическими И хроматографическими методами;

5) определение азотсодержащих соединений мышечной ткани; задача включает определение общего азота, белка, небелкового азота, экстрактивных веществ; анализ свободных аминокислот и адениловых нуклеотидов с использованием различных методов хроматографии и электрофореза и их количественную оценку; определение никотинамид-ных коферментов; определение суммарного содержания нуклеиновых кислот.

А. БЕЛКИ

Белки — высокомолекулярные биополимеры, структурными элементами которых являются а-аминокислоты. Молекулярная масса белков варьирует в очень широких пределах: от 10000 Да до нескольких сотен тысяч и более. Физико-химические и физические свойства белков определяются качественным и количественным составом входящих в них аминокислот.

I. МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА В БИОЛОГИЧЕСКОМТЙАТЕРИАЛЕ

Общий белок в тканях определяют по азоту после их минерализации. Растворимые белки экстрагируют из тканей, осаждают и после растворения осадка в щелочи определяют различными методами.

1. КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

БИУРЕТОВЫЙ МЕТОД

Метод основан на образовании в щелочной среде окрашенного в фиолетовый цвет комплекса пептидных связей с ионами двухвалентной меди. Существуют две разновидности этого метода: при одной из них определяют от 2 до 10 мг белка в пробе, чувствительность другой (микрометода) — от 0,1 до 2 мг.

Реактивы:

1. Стандартный раствор белка, например сывороточного альбумина, содержащий 10 мг в 1 мл.

2. Биуретовый реактив: 0,15 г CuS04-5H20 и 0,6 г МаКС4Н40бХ Х4Н20 (виннокислый натрий-калий, или сегнетова соль) растворяют в 50 мл НгО, при энергичном перемешивании приливают туда 30 мл 10%-ного раствора NaOH (свободного от Na2C03), добавляют 0,1 г KI и раствор доводят водой до 100 мл. Хранят в парафинированной или полиэтиленовой склянке.

К 1 мл раствора, содержащего от 2 до 10 мг белка, добавляют 4 мл биуретового реактива. Пробы перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин, после чего колориметрируют на ФЭКе при 5

страница 40
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
участки с домом за 1000000
Самое выгодное предложение от магазина компьютерной техники КНС - CP-7821-K9 - поставщик it товаров и оборудования.
футбольная форма от 450 рублей
Комплект белья 140*70 Micuna купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.05.2017)