химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

54—104 1005 триадт5лглицерины

105—120 ' 115 \ жирьь'е кис""гм, холестерин, диа цилгльцеоины

* Фракции 1—104—гексан-зфир, фракции 105—120— эфир.

Анализ фракций методом тонкослойной хроматографии. Хроматогра-фическое разделение образцов проводят на пластинках силикагеля в системе гексан—диэтиловый эфир—уксусная кислота (85:15:1). Приготовление пластинок и их проявление осуществляют, как описано на с. 72.

5. ВЫДЕЛЕНИЕ ФОСФОЛИПИДОВ ИЗ ЯИЧНЫХ ЖЕЛТКОВ

Яичные желтки, обрабатывая ацетоном, освобождают от всех липидов, за исключением фосфолипидов Последние из остатка экстрагируют смесью хлороформа и метилового спирта, осаждают ацетоном и хроматографируют на колонке с А120з. Полученные фракции подвергаются анализу с использованием тонкослойной хроматографии. Вся работа по выделению фосфолипидов проводится в холодной комнате.

Реактивы: <

1. Яичные желтки — 10 шт.

2. Этиловый спирт.

3. Метиловый спирт.

4. Ацетон.

5. Хлороформ.

6. Петролейный эфир

7. н-Бутиловый спирт

8. Фосфорномолибденовая кислота.

9. Ледяная уксусная кислота.

10. Нингидрин.

11. А1203.

Фракционированное осаждение фосфолипидов. Яичные желтки тщательно отделяют от белка и гомогенизируют в течение 10 мин с 400 мл ацетона. Гомогенат оставляют в холодной комнате на ночь. Осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин, суспендируют в 400 мл ацетона и снова отделяют центрифугированием. Обработку ацетоном повторяют. Затем осадок наносят тонким слоем на фильтровальную бумагу и высушивают до исчезновения t злпаха ацетона 1—2 ч.

; Высушенный порошок заливают 200 мл смеси хлороформ — метиловый спирт (1:1). Проводят экстрагирование фосфолипидов при встряхивании на механической качалке в течение 30 мин. Раствор центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Центрифугат отделяют и f-сохраняют Обработку осадка повторяют. Если центрифугирование не 1даег полного просветления надосадочной жидкости, проводят фильтрование на воронке Бюхнера. Центрифугаты (фильтраты) объединяют и I выпаривают на роторном испарителе.

После выпаривания смесь фосфолипидов растворяют в 50 мл петро-лейного эфира и добавляют 20-кратный объем (1000 мл) ацетона. Пере-] мешивают и оставляют на ночь. Осадок отфильтровывают на -воронке Бюхнера, растворяют в 50 мл петролейного эфира и осаждение повторяют. Растворы в петролейном эфире обычно бывают мутными. После повторного осаждения и фильтрования осадок промывают 200 мл -ацетона прямо на фильтре.

Хроматографическое разделение фосфолипидов на колонке с А120з. Колонка диаметром 2,5 см высотой не менее 50 см заполняется за 1— 2 сут до разделения фосфолипидов. На дно помещают плотный слой стеклянной ваты толщиной 1 см, затем приливают суспензию из 170— 190 г AI2O3 в смеси метанол—хлороформ (1 : 1).При заполнении колонки следует слегка постукивать по ней деревянной палочкой для равномерного оседания и для получения равномерного слоя адсорбента. Сверху можно положить бумажный фильтр.

Полученную смесь фосфолипидов (10—15 г) растворяют в смеси метанол—хлороформ (1:1) и наносят на колонку. Фосфатидилхолин с примесью лизофосфатидилхолина и сфингомиэлина вымывается 500 мл смеси метанол—хлороформ (1:1). Первые 150 мл и последние 100 мл отбрасывают. После выхода фосфатидилхолина колонку промывают 100 мл той же смеси. Фосфатидилэтаноламин с примесью фосфатидил-серина вымывается 50 мл смеси этанол—хлороформ—вода (5:2:2). Первые 200 мл отбрасывают. Оба элюата упаривают на роторном испарителе досуха и получают приблизительно 5 г лецитина (фосфатидилхолина) и 2,5 г кефалина (фосфатидилэтаноламина).

Анализ фосфолипидов с помощью тонкослойной хроматографии. Для тонкослойной хроматографии используют пластинки «Силуфол» (150X150 мм) и стандартные камеры. В 'Качестве растворителя берут смесь хлороформ—метанол—вода (65:25:4).

На две пластинки на расстоянии 1,5 см от их узкого края наносят микропипеткой хлороформные растворы фракций фосфатидилхолина (в одно пятно) и фосфатидилэтаноламина (в другое пятно) в количестве около 1—5 мкмоль. Пластинки помещают в камеру (предварительно за 2—3 ч для насыщения камеры в нее помещают растворитель). После разделения одну пластинку проявляют 5%-ным спиртовым раствором фосфомолибденовой кислоты (с фосфатидилхолином образуются синие пятна на желтом фоне), другую — 0,3%-ным раствором нингид-рина на я-бутаноле, содержащем 3%-ную уксусную кислоту. Проявляются все фосфолипиды, содержащие NH2-rpynny (фосфатидилэтано««"•"11, «иои^^ц"11 идилс»i аииламии, фисфа гидилсерин;, в виде розовых пятен на белом фоне.

ЛИТЕРАТУРА 1 К е и т с М Техника липидологии. М , 1975.

2. Препаративная биохимия липидов/Под ред. Л. Д. Бергельсона, Э. В. Дятловиц-кой М, 1981

3 Методы изучения состава и метаболизма липидов различных тканей//Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен)/Под ред. М И Прохоровой Л, 1982 С 54

4 Кукси с А Липиды//Хроматография. Практическое приложение метода/Под ред 3 Хефтмана М, 1986 ЧЕС 130

\

Раздел второй

ПРИРОДНЫЕ АЗОТСОДЕРЖА

страница 39
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
надписи с адресом на загородный дом
купить участок по рижскому направлению недорого
массажные курсы
004.070400.027

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)