химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

в непроявленной части пластинки устанавливают путем сопоставления ее с проявленной половиной.

Фосфолипиды. Количественное определение фосфолипидов сводится к измерению содержания фосфата, входящего в состав этих соединений.

Участок силикагеля, содержащий фосфолипиды, а также чистый контрольный участок силикагеля такой же площади и расположенный на том же уровне, осторожно соскабливают с пластинки и переносят в центрифужные пробирки. Добавляют по 4 мл 1 н НС1, приготовленной на метиловом спирте, тщательно размешивают и помещают в водяную баню при 50—60°С на 15 мин. Силикагель отделяют центрифугированием на небольшой скорости (2500 об/мин) в течение 5—10 мин. Центрифугат сливают в колбочки\Аьельдаля (или в жаростойкие пробирки) и упаривают на водяной бане досуха. В ^элбочки добавляют по 0,2—0,25 мл концентрированной H2S04 и проводят минерализацию в течение 1 ч. В минерализате определяют фосфат (с. 45) и рассчитывают суммарное содержание фосфолипидов

Холестерин. В основе количественного определения холестерина лежит цветная реакция холестерина с серной кислотой. Под влиянием концентрированной H2SO4 и уксусного ангидрида холестерин превращается в углеводород с суммарными формулами С54Н86 и C54H8s (бихолестадиены), которые с серной кислотой образуют диеновые кислоты: с двумя молекулами H2S04—продукт красного цвета, с одной молекулой H2SO4 — продукт зеленого цвета (реакция Либермана— Бухардта).

Участок силикагеля, содержащий холестерин, а также контрольный участок (чистый силикагель) соскребают, размельчают, переносят в центрифужные пробирки и элюируют 5 мл хлороформа при тщательном помешивании в течение 1 мин. (^иликагель отделяют на центрифуге (5—10 мин при 1500 об/мин), хлороформенный слой сливают. Отбирают из него точный объем (4 мл), выпаривают досуха, в сухом остатке проводят количественное определение холестерина Для этого пробирки с сухими остатками, контрольную пробу на реактивы и две пробирки со стандартом чистого холестерина (5—100 мкг в пробирке) помещают на песчаную баню с температурой ПО—120°С на 30 мин. Затем в пробирки добавляют по 1 мл ледяной уксусной кислоты, перемешивают стеклянной палочкой, не вынимая из бани. Выдерживают 1—2 мин (по секундомеру) и переносят все пробы в водяную баню с температурой 25°С на 10 мин (до полного выравнивания температуры), приливают по 2 мл смеси уксусного ангидрида с концентрированной H2SO4 (20:1). Смесь готовят непосредственно перед употреблением, сливая охлажденные растворы. Пробы инкубируют в темноте при 25°С 30 мин и измеряют интенсивность зеленой окраски на ФЭКе или на спектрофотометре при длине волны 625 нм.

4. ВЫДЕЛЕНИЕ ТРИАЦИЛГЛИЦЕРИНОВ ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ

Липиды печени крыс экстрагируют смесью хлороформ — метанол (2:1) Триацилглицерины выделяют с помощью колоночной хроматографии на силикагеле.

Реактивы:

1. NaCl — 0,9%-ный раствор.

2. Метиловый спирт.

3. Хлороформ.

4 Диэтиловый эфир.

5. Бензол.

6. Гексан.

7 Силикагель (100—200 меш).

Экстракция липидов. Печеночную ткань 100 крыс промывают физиологическим раствором, просушивают на фильтровальной бумаге, взвешивают и измельчают ножницами на холоде. Порции по 5 г ткани гомогенизируют в смеси хлороформ-метанол (2:1) в течение 1— 2 мин Полученные экстракты объединяют, разводят такой же смесью из расчета 20 мл на 1 г ткани, перемешивают и через 20 мин фильтруют через пористый фильтр. К фильтрату добавляют 0,2 объема воды, смесь интенсивно встряхивают в делительной воронке и оставляют до полного разделения фаз. Водный слой отсасывают, а нижний упаривают в роторном испарителе. Остаток (2—3 г) растворяют в 10—14 мл сухого бензола и хранят в холодильнике.

Хроматографическое разделение липидов на колонке. 150 г сили-кагеля, обработанного, как указано на с. 69, суспендируют в 500 мл гексана и вносят в колонку (50X3,5 см), следя за тем, чтобы адсорбент при вытекании растворителя упаковывался равномерно в плотный слой без пузырьков воздуха. Для этого колонку слегка встряхивают постукиванием деревянной палочкой или резиновой трубкой, надетой на стеклянную палочку. Необходимо также следить за тем, чтобы верхний слой силикагеля постоянно находился под слоем растворителя. Колонку промывают 150 мл чистого растворителя, оставляют над поверхностью силикагеля слой жидкости в 1—2 мм и наносят на колонку раствор липидов. затем дооавляют 2 раза по 10 мл гексана, дожидаясь каждый раз полного впитывания растворителя в силикагель. Колонку элюиру-ют 1 л смеси гексан—диэтиловый эфир (85:15) и 250 мл диэтилового эфира со скоростью 5 мл/мин, собирая фракции по 10 мл и контролируя разведение с помощью тонкослойной хроматографии. Фракции с одинаковыми значениями Rf объединяют и упаривают.

Массу триацилглицеринов определяют весовым методом. Продукт хранят в виде 5%-ного бензольного раствора при —5°С.

Порядок элюирования

Номера фракций* Масса элюи-рованных веществ, мг Состав фракций

1—20

21—47 550 эфиры холестерина

48—50 •—? —

51—53 130 триацилгпнцерины, следы метило вых эфиров жирных кислот

страница 38
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
стол кухонный стеклянный
аренда телевизора на месяц
как делают узи мягких тканей
домашний кинотеатр купить с установкой

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(21.08.2017)