химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

складчатый фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха на бане при температуре не выше 80°С. Осадок растворяют в 1 мл хлороформа; полученный раствор хранят в пробирке с притертой пробкой.

Приготовление пластинок. Пластинки тонкого закрепленного слоя силикагеля готовят заранее следующим образом.

Стеклянные пластинки размером 17,5x13 см тщательно моют свежеприготовленной хромовой смесью и ополаскивают много раз водопроводной водой, затем 3—5 раз дистиллированной, вытирают чистой марлей, протирают спиртом и хранят в чистом полиэтиленовом пакете в отдельной коробке.

Неподвижной фазой при разделении служит силикагель КСК, для закрепления силикагеля используют химически чистый гипс CaS04. Силикагель измельчают и используют фракцию с размером частиц 100— 200 меш (с. 70).

Для проведения количественного определения фосфолипидов по фосфату нркно проверить силикагель на содержание в нем фосфора. Если «фон» фосфора значителен, силикагель промывают водой, многократно перемешивая суспензию, оставляют на 8—12 ч, после чего воду с самыми мелкими частицами осторожно сливают, а силикагель высушивают в кюветах на воздухе, сначала при комнатной температуре, а затем в течение 48 ч при ПО—П5°С.

Для приготовления сорбционной массы б г силикагеля и 0,35 г гипса энергично встряхивают 3—5 мин в колбочке (можно с резиновой пробкой, защищенной пленкой). Смесь высыпают в ступку и постепен*7 Л

"'НО, при тщательном растирании, неоольшими порциями по 3—5 мл добавляют дистиллированную воду— всего 15—17 мл. Смешивание си-ликагеля и гипса с водой заканчивают в течение 1,5—2 мин (следить по секундомеру!). Полученная масса должна быть однородна и без пузырьков воздуха.

Готовую смесь тонкой непрерывной струей выливают в центр пластинки и покачиванием пластинки распределяют ее ровным слоем по -, всей поверхности. Пластинку сушат при комнатной температуре 24 ч на столике с уровнем, а затем активируют в сушильном шкафу при 105°С в течение 40 мин. Если пластинки не используют сразу, их хранят в эксикаторе над СаС12.

Подготовка хроматографической камеры. Разгонку проводят смесью растворителей гексан—диэтиловый эфир—ледяная уксусная кислота в соотношении 78 :25 :2 в любом герметически закрытом сосуде с плоским дном (крышку можно притирать к стенкам сосуда смазкой). Стенки камеры для лучшего насыщения выстилают фильтровальной бумагой и в камеру наливают смесь растворителей. Во время разгонки бумага должна быть на вид сухая. Следить за тем, чтобы она не погружалась в растворитель, иначе последний будет перетекать на пластинку. Плотно закрытую камеру оставляют на 2—3 ч для насыщения парами растворителя.

Нанесение экстракта на пластинку. Хлороформный экстракт липидов наносят на пластинку с помощью микропипетки. Линия старта должна быть на расстоянии 1,5 см от узкого края пластинки, расстояние между точками нанесения — не менее 1—2 см. Раствор наносят очень маленькими каплями, не прикасаясь пипеткой к пластинке, либо в одну точку, либо узкой горизонтальной полоской (8 мм), капля к капле. Общий объем наносимого экстракта — 0,05—0,1 мл.

Свидетели: 1%-ные хлороформные растворы холестерина, фосфа-тидилэтаноламина и триацилглицеринов (свиное сало), наносят в количестве 0,04—0,05 мл в отдельные точки.

Разделение и проявление. Пластинку помещают в камеру, погружая ее в растворитель на 5 мм. Камеру герметически закрывают. Разгонка продолжается 1 ч при комнатной температуре (для лучшего разделения липиды можно разгонять повторно, предварительно высушив пластинку). Пластинку высушивают на воздухе в течение 30 мин и хроматограмму проявляют, осторожно опрыскивая ее из пульверизатора 10%-ным спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты, и затем (через 1 мин) выдерживают ее в сушильном шкафу при 80—100°С до появления на желтом фоне синих пятен липидов. Избыток проявителя может привести к заметному увеличению окраски фона.

Расположение липидов на хроматограмме следующее: на старте или почти на старте — фосфолипиды, выше — неидентифицированные соединения, затем холестерин, моно-, ди- и триацилглицерины, эфиры холестерина. Между ди- и триацилглицеринами должны располагаться свободные жирные кислоты, но они не проявляются фосфорномолибденовой кислотой18 (проявители свободных жирных кислот: родамин, или 0,2%-ныц спиртовой раствор 2,6-дихлорфлуоресцеина в ультрафиолете) .

Все липиды проявляются в парах йода.

Количественное определение фосфолипидов и холестерина. Для количественного определения липидов хлороформный раствор наносят на пластинку с силикагелем в две крайние точки линии старта. Между ппшп юл/лс п дис шчки наносят смесь стандартных растворов тех веществ, количество которых нужно определить. Проявляют только одну половину пластинки, на которой расположены одна проба опытной смеси и одна — стандартной. Вторую половину пластинки при опрыскивании проявителем осторожно закрывают плотной бумагой Таким образом, вторая проба опытной и стандартной смеси остается для количественных измерений. Локализацию отдельных представителей липидов

страница 37
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
оформление президиума молодых розы и фрезии
Рекомендуем фирму Ренесанс - изготовить лестницу на второй этаж цена - продажа, доставка, монтаж.
скоба изо
KNSneva.ru - предлагает монитор BenQ - Санкт Петербург, ул. Рузовская, д.11, парковка для клиентов.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)