химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

имо активировать.

Хроматография на окиси алюминия. При проведении препаратиз-ных работ хроматография на окиси алюминия имеет ряд преимуществ по сравнению с хроматографией на силикагеле: требуются меньшие объемы растворителей, скорость тока через колонку выше. Для хроматографии фосфолипидов используют окись алюминия IV степени активности. Ее получают путем активации коммерческой окиси алюминия при 110°С в течение 12 ч, после чего на каждые 100 г адсорбента добавляют 10 мл воды и встряхивают смесь в закрытом сосуде в течение 2 ч. При выделении больших количеств фосфолипидов используют стеклянные колонки с отношением диаметра к длине, равным 1 :2,5, в которые помещают до 1000 г адсорбента. При работе с меньшим количеством адсорбента, до 100 г, применяют колонки с отношением 1 :5. Нагрузка колонки не должна превышать 0,5 мг липидного фосфора на 1 г адсорбента.

Однако необходимо отметить, что хроматография многих липид-ных веществ на окиси алюминия сопровождается значительными потерями в результате гидролиза

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО СОДЕРЖАНИЯ ЛИПИДОВ В ТКАНЯХ

Липиды экстрагируют из тканей смесью Фолча, экстракт отмывают от нелипидных примесей солевым раствором. Количественное w

определение суммарных липидов проводят весовым методом.

Реактивы:

1. Хлороформ.

2. Метанол.

3. Смесь хлороформ—метанол в соотношении 2:1 по объему (смесь № 1).

4. NaCl— 0,73%-ный водный раствор (можно заменить 0,88%-ным КС1, 0,05%-ным СаС12).

5. Смесь растворителей, содержащая минеральные соли: хлороформ—метанол—водный раствор NaCl (0,58%) или КО (0,74%) или СаС12(0,04%) в соотношении 3:48:47 (смесь № 2).

Измельченную на холоде навеску ткани (200—250 мг мозга, 300— |Ю0 мг других тканей) помещают в гомогенизатор с тефлоновым или Стеклянным пестиком, заливают 5 объемами смеси № 1 и гомогенизируют в течение 5 мин. Экстракт отделяют от биомассы, сливают в мерный цилиндр. Процедуру повторяют еще 2—3 раза. Измельченную ткань вместе с экстрактом количественно переносят в мерный цилиндр (конечное разведение ткани 1 :20), перемешивают и через 20 мин фильтруют через обезжиренный фильтр или центрифугируют при 1000 g" в течение 15—20 мин К центрифугату добавляют 0,73%-ный водный раствор хлорида натрия в объеме, составляющем 20% от объема экстракта липидов. Экстракт перемешивают и центрифугируют при 600 g в течение 15—20 мин. После центрифугирования система разделяется на две фазы. Верхнюю фазу осторожно декантируют с помощью шприца и пипетки с оттянутым концом, отбрасывают Поверхность нижней фазы и внутренние стенки центрифужной пробирки ополаскивают 3 мл смеси № 2, тщательно следя за тем, чтобы не было перемешивания нижней фазы и промывной смеси Последнюю отбрасывают и промывание повторяют еще 2 раза. После удаления промывной смеси к нижней фазе, т. е. к хлороформному раствору липидов, прибавляют по каплям метанол до образования однофазной системы, раствор перемешивают.

Количество липидов определяют весовым методом.

Круглодонную колбу для роторного испарителя доводят до постоянного веса, помещают в нее экстракт липидов, содержащий не менее 10—20 мг липидов, растворитель упаривают на роторном испарителе. Колбу с осадком липидов доводят до постоянного веса в вакуум-эксикаторе над КОН. Путем повторного взвешивания определяют вес осадка липидов и рассчитывают содержание липидов в тканях в процентах с учетом взятой навески. Взвешивание проводят на аналитических весах.

Данную работу можно проводить, пользуясь бюксами или небольшими стаканчиками и термостатом при температуре 60°С.

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛИПИДОВ МОЗГОВОЙ ТКАНИ С ПОМОЩЬЮ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ

Липиды экстрагируют из ткани органическими растворителями, разделяют с помощью хроматографии в тонком закрепленном слое силикагеля, извлекают из сорбента и определяют количественно, используя специфические цветные реакции.

Реактивы:

1. Хлороформ.

2. Метиловый спирт.

3. Гексан.

4. Диэтиловый эфир (эфир серный).

5. Силикагель.

6. Холестерин—1%-ный хлороформный раствор.

7. Холестерин — ОД мг/мл (стандартный раствор).

8. Фосфатидилэтаноламин (кефалин) — 1%-ный хлороформный раствор.

9. Свиное сало.

10. СНзСООН — ледяная.

11. H2SO4 — концентрированная.

12. Фосфорномолибденовая кислота — 10%-ный спиртовой раствор.

13. Уксусный ангидрид.

14. Реактивы для определения фосфора (с. 34).

15. CaSCU (гипс).

20%-ный раствор СаС12 приливают при энергичном помешивании к 20%-ному раствору H2S04. Выпавший мелкодисперсный осадок промывают водой до нейтральной реакции, высушивают и прокаливают при 180° С в течение 1—2 сут. Полученный гипс хранят в плотно закрытой банке.

Экстракция липидов из мозговой ткани. В небольшую коническую колбу с притертой пробкой помещают 300—400 мг мозговой ткани. Ткань растирают стеклянной палочкой и заливают 25 мл свежеприготовленной смеси хлороформа и метилового спирта (2:1). Содержимое колбы энергично встряхивают в течение 3—5 мин и оставляют на 10 мин при комнатной температуре. Затем фильтруют через маленький бумажный

страница 36
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
прокат светового и звукового оборудования
Рекомендуем фирму Ренесанс - изготовление лестницы- быстро, качественно, недорого!
стул изо
аренда кладовки в подмосковье

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)