химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

, по схеме. Последним добавляют экстракт, содержимое проб быстро переме-апивают и помещают в водяной термостат при 30°С. Инкубацию проводят в течение 20 мин.

Схема проведения опыта

Состав проб, мл

пробы глюкоз о 1-ф ос фат гликоген АМФ раствор № 2 экстракт

1,2 0,4 0,4 0,2 1,0

3,4 0,4 0,4 0,2

1,0

5,6 0,4 0,6 1,0

По окончании инкубации пробы вынимают из термостата, помещают в лед и приливают равный объем охлажденного 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Осадок белка удаляют центрифугированием, в безбелковом растворе определяют неорганический фосфат.

Пробы 5 и 6 ставят для учета нарастания неорганического фосфата в процессе инкубации за счет возможного фосфатазного расщепления глюкозо-1-фосфата. Количество неорганического фосфата, определенное в этих пробах, вычитают из 1—4 проб. На основании полученных данных можно рассчитать процент превращения глюкозо-1-фосфата в гликоген под влиянием фосфорилазы а и фосфорилазы Ъ в исследуемых мышцах, выражая прирост неорганического фосфата в микромолях в минуту на 1 г сырого веса ткани.

ВЛИЯНИЕ АДРЕНАЛИНА НА УРОВЕНЬ САХАРА КРОВИ И АКТИВНОСТЬ ФОСФОРИЛАЗЫ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ

В работе предлагается определить содержание сахара в крови и процент превращения глюкозо-1-фосфата в гликоген в мышцах под влиянием фосфорилазы а и Ь после введения животному адреналина.

Гормон мозгового вещества надпочечников адреналин является активатором аденилатциклазы — фермента, катализирующего, образование цАМФ. Это вещество активирует цАМФ-зависимую протеинки-*азу, что приводит к ускорению фосфоролитического распада гликоте-ia в печени и мышцах.

Подготовка животного. Крысе весом 200—250 г вводят внутри-5рюшинно адреналин (коммерческий) из расчета 0,4 мг на 1 кг веса кивотного. Через 2 ч из яремной вены берут шприцем кровь и выли-»ают ее в пробирку с оксалатом (для предотвращения свертывания). Три отсутствии навыков взятия крови из яремной вены кровь соби-)ают в фарфоровую чашку с оксалатом в момент декапнтации.

В мышечном экстракте, полученном, как описано ранее (с. 50), 1сследуют процент превращения глюкозо-1-фосфата в гликоген под влиянием фосфорилазы а и Ъ (с. 58). В крови определяют содержание глюкозы глюкозооксидазным методом (с. 18) или методом Хаге-дорна—Иенсена (с. 21). В качестве контроля используют те же ткани крысы, которой не вводили адреналин, проводя с ними соответствующие определения. Полученные результаты оформляют в виде таблицы.

ПРЕВРАЩЕНИЕ ГЛЮКОЗО-1-ФОСФАТА В ГЛКЖОЗО-6-ФОСФАТ

Фосфоглюкомутаза (КФ 2.7.5.1) катализирует обратимое превращение глюкозо-1-фосфата в глюкозб-б-фосфат. Равновесие реакции сильно сдвинуто в сторону образования глюкозо-6-фосфата и устанавливается, когда около 95% фосфогексоз находится в форме глюкозо-б-фосфата. Фермент относительно термостабилен и не инактивируется при нагревании до 65°С. В задаче предлагается проследить за превращением глюкозо-1-фосфата в глюкозо-6-фосфат, используя мышечный экстракт, в котором предварительной термообработкой инактивирова-на глюкозофосфатизомераза.

Получение препарата фосфоглюкомутазы из мышц. В качестве источника фермента можно использовать мышцы крысы, кролика или голубя. В маленькой фарфоровой чашке взвешивают 15 г мышц (получение см. на с. 49), тщательно измельчают ножницами, переносят в ступку, добавляют двойной объем холодной дистиллированной воды и растирают пестиком до получения гомогенной массы с добавлением небольшого количества промытого кварцевого песка. Экстрагируют ткань в течение 30 мин. Все процедуры осуществляют на холоде, реактивы и необходимая посуда должна находиться в кювете со льдом.

Мышечный гомогенат центрифугируют 10 мин в центрифуге с охлаждением при 12 000 g. Для инактивации глюкозофосфатизомера-зы проводят тепловую обработку. Мутный экстракт из центрифужных пробирок сливают в стеклянный стакан, доводят его рН до 5,0, добавляя по каплям 1 н. СНзСООН при постоянном перемешивании стеклянной палочкой. Проводят тепловую обработку: стакан с экстрактом помещают в водяную баню, нагретую до 85—90°С, и нагревают экстракт, поддерживая указанную температуру в бане, до тех пор, пока его температура достигнет 65° (экстракт постоянно перемешивают). По окончании тепловой обработки стакан с экстрактом помещают в ледяную баню и охлаждают его до 4°С. Осадок денатурированных белков отделяют центрифугированием или фильтрованием. Центрифугат (фильтрат) хранят в рефрижераторе и используют его как источник фосфоглюкомутазы. Так как ферментативная активность сохраняется в течение нескольких недель, экстракт можно использовать при проведении повторных экспериментов.

Реактивы:

1. Имидазольный буфер — 0,2 М раствор, рН 7,5.

2. MgS04-7H20 — 0,02 М раствор.

3. Глюкозо-1-фосфат — 0,02 М раствор.

4. Препарат фосфоглюкомутазы, рН 7,5.

5. Реактивы для определения неорганического фосфата (см. с. 34).

6. NaOH — 2,0 и 0,4 н. растворы.

7. НС1 — 2,0 и 1,0 н. растворы.

Перед началом работы нужное для постановки опыта количество экстракта разводят в 5 раз дистиллир

страница 30
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
новогоднее представление крокус
тумба фьорд размеры
недвижимость на новой риге
наклейка 220в по госту

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.10.2017)